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cuicchao金蟲 (正式寫手)
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[求助]
畢赤酵母用于電轉(zhuǎn)化制備感受態(tài)細胞步驟
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畢赤酵母電轉(zhuǎn)化： 介紹：該方法無需產(chǎn)生去壁細胞，是產(chǎn)生畢赤酵母重組子的簡便方法。與去壁細胞效率 相似。 細胞準備： 1 在含5mlYPD 的50ml 離心管中，培養(yǎng)畢赤酵母，30 度過夜 2 取0.1-0.5ml 過夜培養(yǎng)物，接種含500ml 新鮮培養(yǎng)基的2L 搖瓶，過夜生長至OD600 ＝1.3-1.5 3 在4 度，1500g離心5min收集細胞,用500ml預冷的滅菌水懸浮細胞 4 如上離心，用250 ml預冷的滅菌水懸浮細胞 5 如上離心，用20ml預冷的1M山梨醇懸浮細胞 6 如上離心，用1 ml 預冷的1M山梨醇懸浮細胞，至終體積約1.5ml 注意：可凍存80ul 等量的電感受態(tài)細胞，但轉(zhuǎn)化效率會降低很多 有誰能告訴我這步驟里面滅菌水，山梨醇處理細胞畢赤酵母細胞的原理是什么��？ |
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