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xjtu0025

新蟲 (小有名氣)

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[求助] 想問一下關(guān)于用pET-32a載體表達(dá)小片段蛋白

我現(xiàn)在想用pET-32A表達(dá)兩個(gè)多肽，一個(gè)81aa一個(gè)50aa的�？戳税胩炷莻€(gè)圖譜，有很多標(biāo)簽可以選擇，我有個(gè)疑問是我想在想用Xba I 和EcoR I。但是這樣在圖譜上面，我切完以后rbs區(qū)沒了并且只留下最后面那個(gè)his-tag。
是否這樣我不應(yīng)該在片段基因上設(shè)計(jì)終止子，直接用histag后面那個(gè)。然后表達(dá)出來的就是可以鎳柱純化的？
另外我切掉了rbs區(qū)，并且開頭里lac operator很近。自身帶有TAG這樣可行么

附件有pET-32a圖譜。。望使用的人解答一下~~

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附件 1 : pET32a圖譜.pdf

2013-05-08 11:38:31, 37.03 K

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1樓 2013-05-08 11:38:35

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Haibara_Ai

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【答案】應(yīng)助回帖

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xjtu0025: 金幣+1, ★有幫助 2013-05-08 22:19:19
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖應(yīng)助！ 2013-05-08 22:58:19

沒有rbs當(dāng)然不行，當(dāng)然你可以克隆一個(gè)rbs進(jìn)來
另外atg和rbs的距離變化也不能太大 6/7是比較安全的，同RNA兩個(gè)短肽第二個(gè)rbs之前最好加一個(gè)insulator，這樣才能確保穩(wěn)定表達(dá)。

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2樓2013-05-08 21:07:34