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蛋白質(zhì)SDS-PAGE跑的條帶很多，但做二維電泳點很少，且縱條紋很多，請教什么原因呢？
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| 提蛋白質(zhì)，先做個小膠SDS-PAGE，跑出來的條帶挺多，也挺清楚的，但是做二維電泳的結(jié)果卻很不好：點很少，縱條紋很多。用的考馬斯亮藍染色的，操作方法技術(shù)都正確，就是找不到原因。求助，求助，求助！��！非常感謝�。�！ |
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cicelyzh
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2樓2013-05-15 08:05:39
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憧雪3136樓2013-05-15 23:57:29
7樓2013-05-16 11:56:36
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憧雪313: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-05-16 16:32:50
憧雪313: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-05-17 22:00:10
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膠條中殘留少量蛋白也是正常的，不過殘留太多就不好了。殘留蛋白主要是因為變性不充分，蛋白表面沒有充分結(jié)合SDS，電荷不夠，所以電泳時會跑得非常慢。膠條從第一向下來因為表面有油，油會影響變性時溶液浸入膠條。先用鑷子夾住膠條在濾紙上盡量吸去油，然后再進行變性處理。如果變性困難的樣品，可以適當(dāng)延長變性時間，實在不行的話，可以增加變性時的平衡緩沖液中SDS的含量。放膠條也有一定技巧，也很難說清楚。一般是先在第二向膠面上放電泳緩沖液，然后把膠條推到膠面盡量接觸，然后再吸去多余的緩沖液，再用瓊脂糖固定。 |
8樓2013-05-16 12:11:19
9樓2013-05-16 16:32:19
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