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蛋白質(zhì)SDS-PAGE跑的條帶很多，但做二維電泳點(diǎn)很少，且縱條紋很多，請(qǐng)教什么原因呢？
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| 提蛋白質(zhì)，先做個(gè)小膠SDS-PAGE，跑出來(lái)的條帶挺多，也挺清楚的，但是做二維電泳的結(jié)果卻很不好：點(diǎn)很少，縱條紋很多。用的考馬斯亮藍(lán)染色的，操作方法技術(shù)都正確，就是找不到原因。求助，求助，求助�。。》浅８兄x�。�！ |
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cicelyzh
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首先，你的上樣量夠嗎？跑一向普通的SDS-PAGE的樣品放到二維的2D上的量是不夠的，起碼需要增加3-5倍。 其次，你說(shuō)的縱向條紋是什么樣的，有圖嗎？縱向條紋的話(huà)，應(yīng)該是第二向的問(wèn)題。如果可以排除第二向膠本身的問(wèn)題的話(huà)，有可能是膠條下來(lái)變性處理沒(méi)做好。 |
2樓2013-05-15 08:05:39
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憧雪3136樓2013-05-15 23:57:29
7樓2013-05-16 11:56:36
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膠條中殘留少量蛋白也是正常的，不過(guò)殘留太多就不好了。殘留蛋白主要是因?yàn)樽冃圆怀浞�，蛋白表面沒(méi)有充分結(jié)合SDS，電荷不夠，所以電泳時(shí)會(huì)跑得非常慢。膠條從第一向下來(lái)因?yàn)楸砻嬗杏�，油�?huì)影響變性時(shí)溶液浸入膠條。先用鑷子夾住膠條在濾紙上盡量吸去油，然后再進(jìn)行變性處理。如果變性困難的樣品，可以適當(dāng)延長(zhǎng)變性時(shí)間，實(shí)在不行的話(huà)，可以增加變性時(shí)的平衡緩沖液中SDS的含量。放膠條也有一定技巧，也很難說(shuō)清楚。一般是先在第二向膠面上放電泳緩沖液，然后把膠條推到膠面盡量接觸，然后再吸去多余的緩沖液，再用瓊脂糖固定。 |
8樓2013-05-16 12:11:19
9樓2013-05-16 16:32:19
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