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[求助]
藥代動力學(xué)中提取回收率低的問題 已有2人參與
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請教各位大俠，我做一個中藥兩個成分的藥代動力學(xué)， 方法為2倍量甲醇直接沉淀蛋白，上清液吹干，復(fù)溶。 回收率做法：吸相應(yīng)高中低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液吹干，加200ul空白血漿，在按血漿處理辦法處理，記錄峰面積A1。洗相應(yīng)高中低標(biāo)準(zhǔn)品溶液吹干，定容至相應(yīng)濃度，記錄峰面積A2。所得回收率=A1/A2，值在70%~76%之間，文獻(xiàn)報道為90%以上。而且質(zhì)控樣品每個濃度平行的五份中每份的峰面積有所差異，標(biāo)準(zhǔn)曲線做出來也很丑，不能達(dá)到要求。 我想請教各位在做質(zhì)控樣品時，取相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品溶液吹干后，是直接加空白血漿混勻呢，還是先加甲醇混勻后在加空白血漿好（我所測兩成分不溶于水）。這種回收率是不是證明方法有問題啊，還是操作不當(dāng)。跪求各位大俠指導(dǎo)。謝謝 |
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blacksoul
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【答案】應(yīng)助回帖
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你這個沉淀蛋白做回收率跟我們做的好像有點不一樣。我們的做法是如果你選擇終濃度10ng、100ng、1000ng的三種基質(zhì) 提取組：那就取45ul空白血漿，加入100ng、1000ng、10ug的標(biāo)準(zhǔn)工作液5ul，然后加入100ul含內(nèi)標(biāo)甲醇沉淀劑，二次離心取上清進(jìn)樣。 提取后組：那就取45ul空白血漿，然后加入100ul含內(nèi)標(biāo)甲醇沉淀劑，加入100ng、1000ng、10ug的標(biāo)準(zhǔn)工作液5ul，二次離心取上清進(jìn)樣。 用提取組與提取后組的峰面積比來算提取回收率，一般沉淀蛋白法提取回收率很高啊。不是很理解你前面那步揮干工作液的目的 |
7樓2015-11-09 14:05:26
airhblue11
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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直接用甲醇沉淀的方法，70~76%我覺得已經(jīng)是可接受的范圍了，個人覺得在能測到的前提下，提取回收率達(dá)不到90%也無所謂，只要低中高濃度下它的回收率比較平穩(wěn)就可以。 如果覺得回收率低，可以考慮用其他方法，如極性比較小的話考慮用乙酸乙酯萃取，也可以加入少量甲醇后用乙酸乙酯萃取，也可以用其他二元試劑。如果化合物熱或光不穩(wěn)定，那就要低溫、避光處理或甲醇一步沉淀法，也可以考慮加入一些酸進(jìn)行保護。 還有提取回收率做法與我常用的方法有區(qū)別：我是往空白血漿中加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液，然后按樣品處理;另一份是空白血漿吹干后加相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品溶液復(fù)溶。 |
2樓2013-06-30 10:32:11
3樓2013-07-03 19:51:09
kkbyb
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4樓2013-07-03 22:01:38
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