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標(biāo)準(zhǔn)血漿的處理 已有1人參與
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最近在做藥動(dòng)學(xué)，有幾個(gè)疑問向請教一下大家。 一、在做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)兩種方法哪種對啊？ 我取的是100μL空白血漿，加內(nèi)標(biāo)10μL，兩倍體積甲醇沉淀蛋白，渦旋（渦旋時(shí)間有必要考察嗎？）后，12000R/min離心10min，取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣量5μL。 1.直接加10μL不同濃度的對照品溶液在血漿里面配成一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)血漿。這個(gè)濃度時(shí)按照100μL作為體積來看，還是還應(yīng)算成110μL或者血漿加成90μL。那么在我后面給藥后取血漿的樣品中沒有加這10μL的對照品，那么是不是應(yīng)該在血漿中加入10μL甲醇，10μL內(nèi)標(biāo)后再兩倍體積甲醇沉淀蛋白，來和方法學(xué)考察中提取的方法保持一致？ 2.將對照品氮?dú)獯蹈珊蠹尤?00μL空白血漿，10μL內(nèi)標(biāo)物，兩倍體積甲醇沉淀蛋白，渦旋后，12000R/min離心10min，取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣量5μL。 二、從經(jīng)驗(yàn)上來判斷取上清液進(jìn)樣的回收率高還是上清液吹干復(fù)溶回收率高？做提取回收率的時(shí)候是直接與同濃度對照品溶液峰面積比來算還是空白血漿處理好以后再加同濃度對照品溶液復(fù)溶后峰面積比來計(jì)算呢？ 三、標(biāo)準(zhǔn)曲線是要取六個(gè)來源不同的空白血漿來做平行還是都用一只兔子的空白血漿就行？那么計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)是拿六個(gè)點(diǎn)的平均數(shù)來算嗎？ 四、以后的樣品測定中每批的隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線是要每天都重做嗎？可以保留之前做的反復(fù)進(jìn)樣來做標(biāo)曲嗎？ 問題比較多，拜托大家了~ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
桑枝: 金幣+12, ★★★很有幫助 2015-01-31 10:35:03
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桑枝: 金幣+12, ★★★很有幫助 2015-01-31 10:35:03
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一，標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法，很二種比較規(guī)范。但操作復(fù)雜，可簡化為加標(biāo)液后，加空白血，再加內(nèi)標(biāo)，加沉淀劑甲醇的時(shí)候減去標(biāo)液體積10ul,加190ul。 二，回收率肯定是直接蛋白沉淀的比較高。計(jì)算回收率的對照品是空白血漿處理后，再加入標(biāo)準(zhǔn)溶液。 三，如果用液質(zhì)做，要考察不同來源基質(zhì)的基質(zhì)效應(yīng)。做標(biāo)曲的時(shí)候，可以將不同來源的基質(zhì)混合即可。做一條標(biāo)曲就可以。 四，正規(guī)做法是每個(gè)分析批標(biāo)曲新鮮配置。 |
2樓2015-01-28 19:03:20
3樓2015-01-28 20:15:41
rosegarden
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5樓2015-01-28 20:30:02
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7樓2015-03-07 14:47:30
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