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桑枝新蟲 (初入文壇)
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[求助]
標(biāo)準(zhǔn)血漿的處理 已有1人參與
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最近在做藥動(dòng)學(xué)，有幾個(gè)疑問向請(qǐng)教一下大家。 一、在做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)兩種方法哪種對(duì)啊？ 我取的是100μL空白血漿，加內(nèi)標(biāo)10μL，兩倍體積甲醇沉淀蛋白，渦旋（渦旋時(shí)間有必要考察嗎？）后，12000R/min離心10min，取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣量5μL。 1.直接加10μL不同濃度的對(duì)照品溶液在血漿里面配成一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)血漿。這個(gè)濃度時(shí)按照100μL作為體積來看，還是還應(yīng)算成110μL或者血漿加成90μL。那么在我后面給藥后取血漿的樣品中沒有加這10μL的對(duì)照品，那么是不是應(yīng)該在血漿中加入10μL甲醇，10μL內(nèi)標(biāo)后再兩倍體積甲醇沉淀蛋白，來和方法學(xué)考察中提取的方法保持一致？ 2.將對(duì)照品氮?dú)獯蹈珊蠹尤?00μL空白血漿，10μL內(nèi)標(biāo)物，兩倍體積甲醇沉淀蛋白，渦旋后，12000R/min離心10min，取上清液進(jìn)樣，進(jìn)樣量5μL。 二、從經(jīng)驗(yàn)上來判斷取上清液進(jìn)樣的回收率高還是上清液吹干復(fù)溶回收率高？做提取回收率的時(shí)候是直接與同濃度對(duì)照品溶液峰面積比來算還是空白血漿處理好以后再加同濃度對(duì)照品溶液復(fù)溶后峰面積比來計(jì)算呢？ 三、標(biāo)準(zhǔn)曲線是要取六個(gè)來源不同的空白血漿來做平行還是都用一只兔子的空白血漿就行？那么計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)是拿六個(gè)點(diǎn)的平均數(shù)來算嗎？ 四、以后的樣品測(cè)定中每批的隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線是要每天都重做嗎？可以保留之前做的反復(fù)進(jìn)樣來做標(biāo)曲嗎？ 問題比較多，拜托大家了~ |
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送紅花一朵 9樓2015-03-07 21:09:56
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
桑枝: 金幣+12, ★★★很有幫助 2015-01-31 10:35:03
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
桑枝: 金幣+12, ★★★很有幫助 2015-01-31 10:35:03
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一，標(biāo)準(zhǔn)曲線的做法，很二種比較規(guī)范。但操作復(fù)雜，可簡(jiǎn)化為加標(biāo)液后，加空白血，再加內(nèi)標(biāo)，加沉淀劑甲醇的時(shí)候減去標(biāo)液體積10ul,加190ul。 二，回收率肯定是直接蛋白沉淀的比較高。計(jì)算回收率的對(duì)照品是空白血漿處理后，再加入標(biāo)準(zhǔn)溶液。 三，如果用液質(zhì)做，要考察不同來源基質(zhì)的基質(zhì)效應(yīng)。做標(biāo)曲的時(shí)候，可以將不同來源的基質(zhì)混合即可。做一條標(biāo)曲就可以。 四，正規(guī)做法是每個(gè)分析批標(biāo)曲新鮮配置。 |
2樓2015-01-28 19:03:20
桑枝
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3樓2015-01-28 20:15:41
rosegarden
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4樓2015-01-28 20:27:08
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