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sls19881024銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
原核表達相關(guān)操作
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| 大家在做原核表達的時候有沒有遇到連接不上的情況啊 雙酶切的條帶都很單一，T4 ligase連接過夜后，涂平板不長菌斑咋回事��？ |
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武穆大成
木蟲 (著名寫手)
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2樓2013-07-04 21:56:53
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4樓2013-07-05 09:18:06
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連接就是這樣的，首先你要優(yōu)化體系、操作，然后有時真的是靠運氣的。。。。 建議：1.像樓上說的，確定酶切沒問題 2.優(yōu)化片段與質(zhì)粒的配比，可以多做幾個配比的同時連接過夜 3.16度或22度（根據(jù)連接酶來確定）連接過夜后，轉(zhuǎn)一批；剩下的繼續(xù)4度連接幾小時轉(zhuǎn)一批；甚至4度連接1天以后都可以試一下的 4.最后確定抗生素、濃度是否正確 5.祈求好運。。。 |
5樓2013-07-05 10:49:20
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6樓2013-07-05 18:26:13
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