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sls19881024銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
原核表達(dá)相關(guān)操作
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| 大家在做原核表達(dá)的時(shí)候有沒(méi)有遇到連接不上的情況啊 雙酶切的條帶都很單一，T4 ligase連接過(guò)夜后，涂平板不長(zhǎng)菌斑咋回事��？ |
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lwiaanngg
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3樓2013-07-05 08:19:16
武穆大成
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2樓2013-07-04 21:56:53
sls19881024
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4樓2013-07-05 09:18:06
bleach060452
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【答案】應(yīng)助回帖
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連接就是這樣的，首先你要優(yōu)化體系、操作，然后有時(shí)真的是靠運(yùn)氣的。。。。 建議：1.像樓上說(shuō)的，確定酶切沒(méi)問(wèn)題 2.優(yōu)化片段與質(zhì)粒的配比，可以多做幾個(gè)配比的同時(shí)連接過(guò)夜 3.16度或22度（根據(jù)連接酶來(lái)確定）連接過(guò)夜后，轉(zhuǎn)一批；剩下的繼續(xù)4度連接幾小時(shí)轉(zhuǎn)一批；甚至4度連接1天以后都可以試一下的 4.最后確定抗生素、濃度是否正確 5.祈求好運(yùn)。。。 |
5樓2013-07-05 10:49:20
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