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307314新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
熒光定量PCR 結(jié)果出來(lái) 內(nèi)參和目的基因的ct 都相差不大 可能原因有哪些？
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第一：抽提了幾次RNA, 結(jié)果都是這樣，理論上 內(nèi)參CT應(yīng)該比目的CT 少,至少兩個(gè)循環(huán)吧？ 第二:我抽提的RNA 測(cè)濃度為359.9ng/微升,A260/A280為2.08，這結(jié)果應(yīng)該表明我抽提的RNA 沒(méi)怎么降解 和DNA污染吧？ 第三： 我用了TAKALA 的PrimeScritpt RT reagent Kit writh gDNA Eraser 的反轉(zhuǎn)錄試劑盒，加入Total RNA 量是1/0.3599=2.778微升的RNA抽提液，使其終濃度為1ng/ul,(符合試劑盒要求的：20ul反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中，SYBR染色PCR法最多可使用1ug的Total RNA) 這一步也沒(méi)錯(cuò)的話，那應(yīng)該說(shuō)我抽提的RNA 沒(méi)什么問(wèn)題吧？ 最后結(jié)果是：為什么定量結(jié)果如題目所說(shuō)的那樣的呢？ 另外熒光出來(lái)的擴(kuò)增曲線 都是單峰 |
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momo12345678
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