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flwilliam銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
引物設(shè)計(jì)時(shí)酶切位點(diǎn)的添加。
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請(qǐng)教下各位，在引物設(shè)計(jì)時(shí)如果直接在5段加上酶切位點(diǎn)，那么這個(gè)引物的相關(guān)評(píng)估會(huì)改變么？還可以用PP5對(duì)添加了酶切位點(diǎn)的引物進(jìn)行評(píng)估么？ 我是個(gè)新手，望各位不吝賜教。 |
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flwilliam
銀蟲 (小有名氣)
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4樓2013-10-06 13:39:44
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flwilliam: 金幣+5 2013-10-06 13:40:20
| 其實(shí)引物的設(shè)計(jì)沒有想象的呃那么麻煩，你用PP證明酶切位點(diǎn)你的序列里沒有就可以了，設(shè)計(jì)的時(shí)候保護(hù)堿基也按照提示的加就可以了，如果想檢測(cè)，測(cè)一下CG含量不高于70%就不會(huì)有問題了，實(shí)踐是真理，自己P一下，看結(jié)果就一目了然了。祝順利。 |
2樓2013-10-05 14:10:52
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 我之前幫別人設(shè)計(jì)過(guò)帶有酶切位點(diǎn)的引物，首先要先設(shè)計(jì)與模板進(jìn)行完全退火互補(bǔ)的引物，合成出來(lái)以后用這個(gè)引物與模板一起做PCR，如果是產(chǎn)生單一條帶的話就直接在5'末端加酶切位點(diǎn)和保護(hù)堿基就好了，設(shè)計(jì)出來(lái)的長(zhǎng)引物能不能擴(kuò)出來(lái)的很重要的一點(diǎn)是之前的短引物能不能擴(kuò)出來(lái)，當(dāng)然在長(zhǎng)引物設(shè)計(jì)好了之后也需要用引物設(shè)計(jì)軟件看一下引物的二級(jí)結(jié)構(gòu)，其實(shí)很簡(jiǎn)單的。另外長(zhǎng)引物做PCR的條件跟之前的短引物是一樣的。希望可以幫助到你！ |
3樓2013-10-06 10:48:27
flwilliam
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5樓2013-10-06 13:40:10
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