 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1383 | 回復(fù): 3 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
wendywan鐵桿木蟲 (小有名氣)
|
[求助]
real time PCR 結(jié)果很詭異，求助高手�。。�！
|
|
|
最近一直做關(guān)于VEGF gene 的Real time PCR 試驗，用的是roche 480跑的pcr。 詭異的地方在于： 1 第一次sample 濃度為50ng/ul,20ul體系上樣6ul，GAPDH 作為內(nèi)參，結(jié)果顯示出來的CT值為9-10左右，組內(nèi)有人說GAPDH一般在13-15左右才會用，低于13都不會用。覺得我應(yīng)該稀釋模板。但是第一次改有的趨勢都正常。且BDNF作為陽性ctrl，也是正常的。 2 第二次用同樣的sample做。模板濃度稀釋為10ng/ul。上樣5ul。還是GAPDH作為內(nèi)參。這次的結(jié)果是GAPDH 的平均CT 值在14-16之間。結(jié)果目的基因出來的結(jié)果是該減少的全部增加了。不知道哪次的結(jié)果是正常的？ 想問的還有：一般在RNA提出來是測的濃度，作為矯正內(nèi)參的參考。之后在測cDNA濃度是否沒啥用處了，有人說在做反轉(zhuǎn)時加了dNTP后，會影響吸光值，所以cDNA的濃度壓根就不準(zhǔn)。是否是這樣的？ 為什么模板稀釋的濃度不一樣，會出現(xiàn)這么大的差異？像我這種情況，究竟哪次的結(jié)果比較準(zhǔn)確？ 期待大家的幫忙啊！捉急。。。。。。。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有65人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- PCR困惑求助！非常急！
已經(jīng)有6人回復(fù)
- SYBR green 1 real-time PCR 結(jié)果分析
已經(jīng)有4人回復(fù)
- Real-time PCR溶解曲線Tm值，是不是在不同的儀器上做出來的不一樣？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 幫我看看我的PCR那可能出了狀況~
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 熒光定量擴增效率問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求助microRNA real time pcr結(jié)果分析
已經(jīng)有4人回復(fù)
- QPCR之 擴增效率
已經(jīng)有8人回復(fù)
- QPCR擴增效率太低
已經(jīng)有20人回復(fù)
- QPCR之 擴增效率
已經(jīng)有8人回復(fù)
- RT-PCR高手請進
已經(jīng)有4人回復(fù)
- RT-PCR高手請進
已經(jīng)有10人回復(fù)
- real time PCR NTC 陽性擴增
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 關(guān)于Real-time RT-PCR原理、操作過程及應(yīng)用
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 著急！RT-PCR擴增效率低，情況很詭異，求助高手幫忙指點
已經(jīng)有12人回復(fù)
- Real time PCR的擴增片段為什么要在150-250之間，為什么不易過長？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- realtimePCR引物
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 請教real time pcr問題，謝謝！
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【專題】real time pcr目的基因的融解曲線不明白
已經(jīng)有8人回復(fù)
wendywan
鐵桿木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 5979.8
- 散金: 5
- 紅花: 5
- 帖子: 233
- 在線: 484.1小時
- 蟲號: 1373315
- 注冊: 2011-08-19
- 專業(yè): 神經(jīng)生物學(xué)
3樓2013-10-17 13:00:34
taccycle
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
- 金幣: 112.9
- 帖子: 60
- 在線: 19.5小時
- 蟲號: 2364578
- 注冊: 2013-03-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 遺傳學(xué)研究新技術(shù)與方法
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wendywan: 金幣+5 2013-10-17 13:01:06
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wendywan: 金幣+5 2013-10-17 13:01:06
| 相對定量一般都是反轉(zhuǎn)錄的時候把RNA粗略定量一下就好了，cDNA不用定量的，不過反轉(zhuǎn)錄完一般確實是需要稀釋的，稀釋個5到10倍都可以，這個要看RNA濃度了，內(nèi)參的作用是在數(shù)據(jù)分析的時候用的，一般的Ct值落在15-30之間比較好，如果cDNA不稀釋確實會影響定量結(jié)果，但是一般不會有特別大的影響，，我覺得還是以稀釋后的定量結(jié)果為準(zhǔn)，至于你說結(jié)果不好的話是不是你把樣本放錯了�。� |
2樓2013-10-17 12:12:42
taccycle
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
- 金幣: 112.9
- 帖子: 60
- 在線: 19.5小時
- 蟲號: 2364578
- 注冊: 2013-03-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 遺傳學(xué)研究新技術(shù)與方法
4樓2013-10-17 13:07:19
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085701求調(diào)劑初試286分 +4 | secret0328 2026-03-28 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 化學(xué)0703 調(diào)劑 306分 一志愿211 +4 | 26要上岸 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | QiMing7 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
[考研] 346求調(diào)劑 一志愿070303有機化學(xué) +3 | 蘿卜燉青菜 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等調(diào)劑 +7 | 哇呼哼呼哼 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海理工能源動力（085800）310分求調(diào)劑 +3 | zhangmingc 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué) 070300 學(xué)碩 336分 求調(diào)劑 +9 | vv迷 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 08開頭275求調(diào)劑 +4 | 拉誰不重要 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿華東理工大學(xué)081700，初試分?jǐn)?shù)271 +6 | kotoko_ik 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 298調(diào)劑 +3 | jiyingjie123 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +4 | 崔wj 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 一志愿 本科 北科大 化學(xué) 343 +6 | 13831862839 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 352求調(diào)劑 +4 | 大米飯！ 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 各位老師您好：本人初試372分 +5 | jj涌77 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | plum李子 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] B區(qū)考研調(diào)劑 +4 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 13853210211 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 361求調(diào)劑 +3 | Glack 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 接收2026碩士調(diào)劑(學(xué)碩+專碩) +4 | allen-yin 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 石河子大學(xué)（211、雙一流）碩博研究生長期招生公告 +3 | 李子目 2026-03-22 | 3/150 |
|