 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1384 | 回復(fù): 3 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
wendywan鐵桿木蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
real time PCR 結(jié)果很詭異，求助高手啊�。�！
|
|
|
最近一直做關(guān)于VEGF gene 的Real time PCR 試驗(yàn)，用的是roche 480跑的pcr。 詭異的地方在于： 1 第一次sample 濃度為50ng/ul,20ul體系上樣6ul，GAPDH 作為內(nèi)參，結(jié)果顯示出來(lái)的CT值為9-10左右，組內(nèi)有人說(shuō)GAPDH一般在13-15左右才會(huì)用，低于13都不會(huì)用。覺(jué)得我應(yīng)該稀釋模板。但是第一次改有的趨勢(shì)都正常。且BDNF作為陽(yáng)性ctrl，也是正常的。 2 第二次用同樣的sample做。模板濃度稀釋為10ng/ul。上樣5ul。還是GAPDH作為內(nèi)參。這次的結(jié)果是GAPDH 的平均CT 值在14-16之間。結(jié)果目的基因出來(lái)的結(jié)果是該減少的全部增加了。不知道哪次的結(jié)果是正常的？ 想問(wèn)的還有：一般在RNA提出來(lái)是測(cè)的濃度，作為矯正內(nèi)參的參考。之后在測(cè)cDNA濃度是否沒(méi)啥用處了，有人說(shuō)在做反轉(zhuǎn)時(shí)加了dNTP后，會(huì)影響吸光值，所以cDNA的濃度壓根就不準(zhǔn)。是否是這樣的？ 為什么模板稀釋的濃度不一樣，會(huì)出現(xiàn)這么大的差異？像我這種情況，究竟哪次的結(jié)果比較準(zhǔn)確？ 期待大家的幫忙啊！捉急。。。。。。。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有125人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- PCR困惑求助！非常急！
已經(jīng)有6人回復(fù)
- SYBR green 1 real-time PCR 結(jié)果分析
已經(jīng)有4人回復(fù)
- Real-time PCR溶解曲線Tm值，是不是在不同的儀器上做出來(lái)的不一樣？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 幫我看看我的PCR那可能出了狀況~
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 熒光定量擴(kuò)增效率問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 求助microRNA real time pcr結(jié)果分析
已經(jīng)有4人回復(fù)
- QPCR之 擴(kuò)增效率
已經(jīng)有8人回復(fù)
- QPCR擴(kuò)增效率太低
已經(jīng)有20人回復(fù)
- QPCR之 擴(kuò)增效率
已經(jīng)有8人回復(fù)
- RT-PCR高手請(qǐng)進(jìn)
已經(jīng)有4人回復(fù)
- RT-PCR高手請(qǐng)進(jìn)
已經(jīng)有10人回復(fù)
- real time PCR NTC 陽(yáng)性擴(kuò)增
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 關(guān)于Real-time RT-PCR原理、操作過(guò)程及應(yīng)用
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 著急！RT-PCR擴(kuò)增效率低，情況很詭異，求助高手幫忙指點(diǎn)
已經(jīng)有12人回復(fù)
- Real time PCR的擴(kuò)增片段為什么要在150-250之間，為什么不易過(guò)長(zhǎng)？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- realtimePCR引物
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 請(qǐng)教real time pcr問(wèn)題，謝謝！
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【專題】real time pcr目的基因的融解曲線不明白
已經(jīng)有8人回復(fù)
taccycle
銅蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
- 金幣: 112.9
- 帖子: 60
- 在線: 19.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2364578
- 注冊(cè): 2013-03-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 遺傳學(xué)研究新技術(shù)與方法
4樓2013-10-17 13:07:19
taccycle
銅蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
- 金幣: 112.9
- 帖子: 60
- 在線: 19.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2364578
- 注冊(cè): 2013-03-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 遺傳學(xué)研究新技術(shù)與方法
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wendywan: 金幣+5 2013-10-17 13:01:06
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wendywan: 金幣+5 2013-10-17 13:01:06
| 相對(duì)定量一般都是反轉(zhuǎn)錄的時(shí)候把RNA粗略定量一下就好了，cDNA不用定量的，不過(guò)反轉(zhuǎn)錄完一般確實(shí)是需要稀釋的，稀釋個(gè)5到10倍都可以，這個(gè)要看RNA濃度了，內(nèi)參的作用是在數(shù)據(jù)分析的時(shí)候用的，一般的Ct值落在15-30之間比較好，如果cDNA不稀釋確實(shí)會(huì)影響定量結(jié)果，但是一般不會(huì)有特別大的影響，，我覺(jué)得還是以稀釋后的定量結(jié)果為準(zhǔn)，至于你說(shuō)結(jié)果不好的話是不是你把樣本放錯(cuò)了！！ |
2樓2013-10-17 12:12:42
wendywan
鐵桿木蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 5979.8
- 散金: 5
- 紅花: 5
- 帖子: 233
- 在線: 484.1小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1373315
- 注冊(cè): 2011-08-19
- 專業(yè): 神經(jīng)生物學(xué)
|
謝謝！ 樣品應(yīng)該沒(méi)有放錯(cuò)！ RNA濃度測(cè)了之后，用的是M-MLV酶25ul反轉(zhuǎn)的。如果RNA濃度過(guò)大，會(huì)不會(huì)影響反轉(zhuǎn)效果？或者說(shuō)cDNA中還殘余一部分沒(méi)反轉(zhuǎn)完全的RNA或者dNTP之類的，會(huì)后續(xù)影響PCR 的結(jié)果？ 我是在RNA濃度的基礎(chǔ)上稀釋成50ng/ul的，后來(lái)有稀釋成10ng/ul跑的第二次。 另外在請(qǐng)教一下： 熒光強(qiáng)度峰值出現(xiàn)在80-84度，應(yīng)該不會(huì)是二聚體吧？！一般認(rèn)為溫度在80以下出現(xiàn)峰值會(huì)認(rèn)為是二聚體？ |
3樓2013-10-17 13:00:34
|
[考研] 300求調(diào)劑，材料科學(xué)英一數(shù)二 +8 | leaflight 2026-03-24 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600 材料與化工 329分求調(diào)劑 +10 | Mr. Z 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調(diào)劑 +7 | Micky11223 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | A child 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +7 | 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +15 | hhhhxn.. 2026-03-23 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)105500求調(diào)劑 +3 | Ssun。。 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑一志愿哈工大324 +7 | 閆旭東 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 希望上岸阿小楊 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué) 070300 學(xué)碩 336分 求調(diào)劑 +9 | vv迷 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑（080500） +4 | A child 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調(diào)劑 +5 | 李瀟可 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑推薦 +5 | 清酒714 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 359求調(diào)劑 +4 | 王了個(gè)楠 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +7 | 鈕恩雪 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +4 | 柚柚yoyo 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +6 | 藍(lán)山月 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷 +6 | cccchenso 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | 話梅糖111 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 石河子大學(xué)（211、雙一流）碩博研究生長(zhǎng)期招生公告 +3 | 李子目 2026-03-22 | 3/150 |
|