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514278815木蟲 (小有名氣)
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[求助]
原核表達蛋白復(fù)性的具體方案
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原核表達復(fù)性做了一個月了，純出來的量很少，希望蟲友們給點建議吧，最好有詳細的步驟； 由于需要的蛋白量較大，我才用的是柱復(fù)性；包涵體超聲破碎后，用洗滌液洗好后重溶到含8M尿素的緩沖液中；復(fù)性采用梯度復(fù)性8M-2M的梯度在superdex-75上復(fù)性；復(fù)性后進行透析，透析時出現(xiàn)沉淀，開始懷疑透析梯度大過快了，就采用柱上緩慢換液，發(fā)現(xiàn)換液效果不好，真正到達目的緩沖液的蛋白很少；懷疑蛋白在柱子上析出來了。希望蟲友給些建議吧，目前懷疑蛋白復(fù)性效果不佳，希望能給一個合理的柱上復(fù)性方案 |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實驗經(jīng)驗 |
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凌波麗
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這不就是包涵體復(fù)性的問題嗎？要加什么標(biāo)簽呀！ 請見： Purification of inclusion bodies and refolding of proteins http://ishare.iask.sina.com.cn/f/18503995.html |
8樓2013-11-04 12:17:16
shenlin0514
木蟲 (正式寫手)
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| 建議你再分析一下該蛋白的二級結(jié)構(gòu)，是否存在大量的疏水區(qū)域，有時添加Tag可以幫助其復(fù)性。另外，可以考慮表面活性劑的使用。 |
2樓2013-11-01 10:33:59
514278815
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