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zhangyep121銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
求教一個關(guān)于熒光定量PCR的問題
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| 各位，在這里向大家請教關(guān)于PCR的問題，就是我要擴(kuò)增一個1400bp的片段，用常規(guī)PCR擴(kuò)增后，跑膠可以看到目的條帶，可是用同樣條件上熒光定量PCR的機(jī)器就看不到實時擴(kuò)增曲線，請問大家是什么原因造成的呢，請大家各抒己見，謝謝！ |
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zhoulubin
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2樓2013-11-21 11:25:31
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhangyep121: 金幣+10, ★★★很有幫助, 您的回答很有啟發(fā)性，謝謝 2013-11-21 15:13:37
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhangyep121: 金幣+10, ★★★很有幫助, 您的回答很有啟發(fā)性，謝謝 2013-11-21 15:13:37
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一般來說qPCR的擴(kuò)增子要小于200bp 主要還是考慮到擴(kuò)增效率和二級結(jié)構(gòu)的問題 大部分的qPCR設(shè)備只提供30-60s的延長時間 另外 大片段的單鏈DNA在annealing的時候 可能出現(xiàn)分子內(nèi)配對而導(dǎo)致出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu) 從而使得擴(kuò)增失敗 當(dāng)然 也有些特別設(shè)計的試劑盒可以對超過200bp的序列進(jìn)行qPCR |
5樓2013-11-21 13:50:28
cicelyzh
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6樓2013-11-21 13:51:40
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7樓2013-11-21 15:15:22
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