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摩羯的心鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
用擴(kuò)增cDNA的引物擴(kuò)增基因組DNA 已有7人參與
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| 各位親們，我之前用來(lái)擴(kuò)增cDNA的引物用來(lái)擴(kuò)增基因組DNA，剛開(kāi)始的時(shí)候能得到一條目的條帶，但之后幾次，同樣的條件下，不同的DNA樣品，有的會(huì)出現(xiàn)一條目的條帶，但有的除了目的條帶外還會(huì)出現(xiàn)好多條條帶，其中提取基因組DNA時(shí)沒(méi)有加入RNA酶，將測(cè)得序列比對(duì)后，以cDNA為模板和以DNA為模板的序列比對(duì)結(jié)果相似性為99%，但現(xiàn)在我不知道是為什么會(huì)有的出現(xiàn)那么多條帶，PCR條件都是一樣的。各位大神幫幫忙吧~不勝感激 |
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摩羯的心
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7樓2013-12-11 16:22:32
cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 如果你的引物不跨內(nèi)含子，用cDNA為模板與gDNA為模板p出來(lái)的序列理論上是完全相同的。出現(xiàn)多條帶的原因可能是引物的特異性不強(qiáng)，與加不加RNA酶處理gDNA無(wú)關(guān)，因?yàn)镈NA聚合酶是不能以RNA為模板的，RNA只有反轉(zhuǎn)錄成cDNA才能做PCR。 |
2樓2013-12-11 09:34:00
摩羯的心
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4樓2013-12-11 15:39:57
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