當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖

摩羯的心

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 232.3
散金: 41
帖子: 88
在線: 18.8小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1937844
注冊(cè): 2012-08-14
專業(yè): 農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)學(xué)

[求助] 用擴(kuò)增cDNA的引物擴(kuò)增基因組DNA 已有7人參與

各位親們，我之前用來(lái)擴(kuò)增cDNA的引物用來(lái)擴(kuò)增基因組DNA，剛開(kāi)始的時(shí)候能得到一條目的條帶，但之后幾次，同樣的條件下，不同的DNA樣品，有的會(huì)出現(xiàn)一條目的條帶，但有的除了目的條帶外還會(huì)出現(xiàn)好多條條帶，其中提取基因組DNA時(shí)沒(méi)有加入RNA酶，將測(cè)得序列比對(duì)后，以cDNA為模板和以DNA為模板的序列比對(duì)結(jié)果相似性為99%，但現(xiàn)在我不知道是為什么會(huì)有的出現(xiàn)那么多條帶，PCR條件都是一樣的。各位大神幫幫忙吧~不勝感激

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇” 已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有251人回復(fù)
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

如何利用文獻(xiàn)找到的引物查找目的模板？已經(jīng)有8人回復(fù)
用基因組DNA進(jìn)行PCR怎么設(shè)計(jì)引物啊已經(jīng)有10人回復(fù)
已知一個(gè)基因的DNA序列，怎么得到它的cDNA序列，我想做RT-PCR 已經(jīng)有6人回復(fù)
引物設(shè)計(jì) 基因全長(zhǎng)的獲得已經(jīng)有13人回復(fù)
PCR擴(kuò)增DNA序列無(wú)條帶已經(jīng)有46人回復(fù)
QPCR之擴(kuò)增效率已經(jīng)有8人回復(fù)
擴(kuò)增已知序列旁鄰的未知DNA序列已經(jīng)有10人回復(fù)
擴(kuò)增基因CDS區(qū)域如何設(shè)計(jì)引物？已經(jīng)有36人回復(fù)
求助-4Kb的基因P不出來(lái) 已經(jīng)有37人回復(fù)
請(qǐng)問(wèn)，用基因組DNA和cDNA做模板進(jìn)行PCR有什么區(qū)別呀？已經(jīng)有6人回復(fù)
對(duì)于一個(gè)沒(méi)有內(nèi)含子的基因，請(qǐng)問(wèn)用基因組或cDNA作為模板跑PCR對(duì)于結(jié)果有什么影響嗎？已經(jīng)有11人回復(fù)
RT-PCR的cDNA不能擴(kuò)增出目的條帶，只有內(nèi)參基因能擴(kuò)增出來(lái) 已經(jīng)有14人回復(fù)
基因組PCR的問(wèn)題已經(jīng)有3人回復(fù)
大家做RT-qPCR設(shè)計(jì)引物用的什么軟件呀？已經(jīng)有15人回復(fù)
一種比較詳細(xì)的PCR技術(shù) 已經(jīng)有10人回復(fù)
同一引物，RNA為模板沒(méi)擴(kuò)出條帶，DNA為模板擴(kuò)出來(lái)了，說(shuō)明了什么問(wèn)題？已經(jīng)有14人回復(fù)
為什么我的AOA的amoA基因擴(kuò)增不亮已經(jīng)有8人回復(fù)
環(huán)狀基因組的PCR 已經(jīng)有4人回復(fù)
基因組中長(zhǎng)片段PCR應(yīng)該注意的幾個(gè)問(wèn)題已經(jīng)有14人回復(fù)
如何設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增目的基因的ORF？已經(jīng)有6人回復(fù)
【求助/交流】關(guān)于熒光定量PCR中cdna合成的問(wèn)題已經(jīng)有12人回復(fù)
【求助/交流】以cDNA為模板PCR擴(kuò)增目的片段時(shí)條帶較淺原因已經(jīng)有13人回復(fù)

1樓 2013-12-10 21:10:32

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

摩羯的心

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 232.3
散金: 41
帖子: 88
在線: 18.8小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1937844
注冊(cè): 2012-08-14
專業(yè): 農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)學(xué)

引用回帖:

8樓: Originally posted by Genseer at 2013-12-11 16:28:26
這個(gè)問(wèn)題的關(guān)鍵是cDNA序列中不包含內(nèi)含子，而基因組中含內(nèi)含子，因此設(shè)計(jì)擴(kuò)增cDNA的引物用來(lái)擴(kuò)增基因組DNA時(shí)，必須考慮內(nèi)含子的位置。

但就算是引物跨內(nèi)含子那不是也只會(huì)擴(kuò)增到的目的條帶比理論上的片段長(zhǎng)，也不會(huì)出現(xiàn)這么多條雜帶吧？還有我擴(kuò)增到的目的條帶測(cè)序后與設(shè)計(jì)引物所用的mRNA序列相似性為99%，那這樣是不是說(shuō)明，這個(gè)基因沒(méi)有內(nèi)含子呢？

贊一下

回復(fù)此樓

9樓2013-12-11 17:11:29

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

查看全部 19 個(gè)回答

cicelyzh

鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)

MolEPI: 10
應(yīng)助: 1662 (講師)
金幣: 8693.8
紅花: 72
帖子: 3516
在線: 456小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1614001
注冊(cè): 2012-02-13
專業(yè): 生物化學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-12-11 09:58:23
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-11 19:32:51

如果你的引物不跨內(nèi)含子，用cDNA為模板與gDNA為模板p出來(lái)的序列理論上是完全相同的。出現(xiàn)多條帶的原因可能是引物的特異性不強(qiáng)，與加不加RNA酶處理gDNA無(wú)關(guān)，因?yàn)镈NA聚合酶是不能以RNA為模板的，RNA只有反轉(zhuǎn)錄成cDNA才能做PCR。

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2013-12-11 09:34:00

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

摩羯的心

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 232.3
散金: 41
帖子: 88
在線: 18.8小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1937844
注冊(cè): 2012-08-14
專業(yè): 農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)學(xué)

引用回帖:

2樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-11 09:34:00
如果你的引物不跨內(nèi)含子，用cDNA為模板與gDNA為模板p出來(lái)的序列理論上是完全相同的。出現(xiàn)多條帶的原因可能是引物的特異性不強(qiáng)，與加不加RNA酶處理gDNA無(wú)關(guān)，因?yàn)镈NA聚合酶是不能以RNA為模板的，RNA只有反轉(zhuǎn)錄成cDNA ...

引物不跨內(nèi)含子意思是指引物在一個(gè)外顯子里是嗎？如果引物特異性不好，為什么剛開(kāi)始做的時(shí)候都只是批出了一條目的條帶，第二次做的時(shí)候出現(xiàn)好多條帶的情況，這應(yīng)該不是引物特異性不好的原因吧？還有就是之前用這條引物擴(kuò)增cDNA也只是出現(xiàn)一條條帶，如果引物特異性不好，那不是應(yīng)該也會(huì)出現(xiàn)好多條帶嗎？麻煩幫我解答一下吧

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2013-12-11 15:23:47

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

dongge2013

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 12 (小學(xué)生)
金幣: 1481.3
帖子: 144
在線: 55.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2551739
注冊(cè): 2013-07-18
性別: GG
專業(yè): 人類遺傳學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-11 19:32:57

基因組的信息量比cDNA的信息量大的多，所以你的引物針對(duì)于基因組DNA特異性可能沒(méi)那么好，你可以去UCSC網(wǎng)站分析下你的引物質(zhì)量

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2013-12-11 15:39:57

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 0856材料專碩353求調(diào)劑 +5	NIFFFfff 2026-03-20	5/250	2026-03-24 11:46 by 544594351
[考研] 306求0703調(diào)劑一志愿華中師范 +9	紙魚(yú)ly 2026-03-21	10/500	2026-03-24 11:36 by 544594351
[考研] 【雙一流院校新能源、環(huán)境材料，材料加工與模擬招收大量調(diào)劑】 +4	Higraduate 2026-03-22	7/350	2026-03-24 11:23 by 種大樹(shù)
[考研] 材料與化工328分調(diào)劑 +4	。，。，。，。i 2026-03-23	4/200	2026-03-24 11:03 by 544594351
[考研] 298-一志愿中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)-求調(diào)劑 +11	手機(jī)用戶 2026-03-17	12/600	2026-03-23 23:51 by 熱情沙漠
[考研] 材料專業(yè)求調(diào)劑 +11	hanamiko 2026-03-18	11/550	2026-03-23 23:12 by peike
[考研] 一志愿中國(guó)石油大學(xué)（華東）本科齊魯工業(yè)大學(xué) +4	石能偉 2026-03-17	4/200	2026-03-23 17:51 by 17862566385
[考研] 一志愿西安交通大學(xué)材料工程專業(yè) 282分求調(diào)劑 +11	楓橋ZL 2026-03-18	13/650	2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 307求調(diào)劑 +11	冷笙123 2026-03-17	11/550	2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 289材料與化工（085600）B區(qū)求調(diào)劑 +3	這么名字咋樣 2026-03-22	4/200	2026-03-22 17:56 by 云民大李老師
[考研] 求調(diào)劑院校信息 +6	CX 330 2026-03-21	6/300	2026-03-22 15:25 by 無(wú)懈可擊111
[考研] 求調(diào)劑 +3	.m.. 2026-03-21	4/200	2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 0805材料320求調(diào)劑 +3	深海物語(yǔ) 2026-03-20	3/150	2026-03-21 15:46 by 無(wú)際的草原
[考研] 308求調(diào)劑 +3	阿姐阿姐家啊 2026-03-18	3/150	2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 330求調(diào)劑 +4	小材化本科 2026-03-18	4/200	2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 288求調(diào)劑 +16	于海海海海 2026-03-19	16/800	2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 317求調(diào)劑 +5	申子申申 2026-03-19	9/450	2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩337求調(diào)劑 +3	niko- 2026-03-19	6/300	2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 0817 化學(xué)工程 299分求調(diào)劑有科研經(jīng)歷有二區(qū)文章 +22	rare12345 2026-03-18	22/1100	2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 求調(diào)劑 +3	eation27 2026-03-20	3/150	2026-03-20 19:32 by JourneyLucky