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smd1168畢赤酵母轉(zhuǎn)化問(wèn)題
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劃板挑單克隆菌落表面光滑，之前轉(zhuǎn)化未線性化的pPIC3.5k后長(zhǎng)出來(lái)的單克隆也是表面光滑的，后來(lái)發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒要線性化，結(jié)果轉(zhuǎn)入線性化質(zhì)粒后菌落菌落形態(tài)就變了，表面有菌絲狀東西，有點(diǎn)像霉菌，但是是有酒香味的，難道轉(zhuǎn)化進(jìn)質(zhì)粒后酵母形態(tài)發(fā)生變化了么？大家有沒(méi)遇到過(guò)，重復(fù)2次都這個(gè)結(jié)果，萬(wàn)分焦急�。。� [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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3樓2013-12-23 08:14:08
luwei13566
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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額，如果有菌絲了那肯定是染菌了啊，酵母的顏色改變沒(méi)？趕緊去做一個(gè)鏡檢。絲狀真菌和酵母菌肯定不一樣的~， 如果你做幾次都是這個(gè)樣子的話,可能的原因有： 1.你的出發(fā)菌株可能已經(jīng)染菌了。 2.你轉(zhuǎn)化過(guò)程中染的雜菌。如果是電轉(zhuǎn)化最有可能出問(wèn)題的就是電轉(zhuǎn)化杯，如果實(shí)在處理不好就換個(gè)試試 3.你的抗性篩選可能有問(wèn)題。 其實(shí)你可以做一個(gè)菌落PCR驗(yàn)證一下。如果PCR驗(yàn)證了就直接誘導(dǎo)一次。管他什么形狀，關(guān)鍵還是要出蛋白，出活性，如果不出蛋白，沒(méi)有活性再考慮菌落形態(tài)的事情，因?yàn)橐撟C是你的線性化質(zhì)粒導(dǎo)致菌落形態(tài)的改變是一件非常困難的事情。 |
2樓2013-12-23 00:48:42
4樓2013-12-23 12:10:05
5樓2013-12-23 22:23:10
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