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yangjingjing木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
這個(gè)條帶是腫么個(gè)情況��？是構(gòu)建成功不？ 已有1人參與
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這個(gè)是腫么個(gè)情況啊？我的目的基因做PCR的時(shí)候，條帶在500~600bp之間 Sal1和Xho1雙酶切（間隔39bp）以后連接PLNCX2載體，轉(zhuǎn)化后挑單菌落，菌搖起來(lái)以后制備模板，分別用目的基因引物（590bp）和載體引物（175bp）擴(kuò)增，下方最亮的條帶就是500bp的~~~~~~~~~實(shí)驗(yàn)室的SYBR顯色效果越來(lái)越差啊，望見(jiàn)諒 為嘛目的基因擴(kuò)出來(lái)的再500bp左右，載體在600bp左右了？這個(gè)是非特異嗎？可是同樣的，別的幾個(gè)菌落為啥木有呢？ 目的基因擴(kuò)增.jpg 載體擴(kuò)增.jpg |
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4樓2013-12-24 01:32:10
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
yangjingjing(kx444555代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-12-24 08:23:31
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yangjingjing(kx444555代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-12-24 08:23:31
| 說(shuō)明一下你的載體上的引物175bp是怎么回事？菌落PCR鑒定時(shí)可能有假陽(yáng)性，需要做陰性對(duì)照并做進(jìn)一步鑒定。此外，兩個(gè)引物最好是一個(gè)在目的基因上，一個(gè)在載體上，減少假陽(yáng)性的幾率。實(shí)在不行，你可以挑幾個(gè)陽(yáng)性克隆，提質(zhì)粒做酶切鑒定。 |
2樓2013-12-23 23:17:28
yangjingjing
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3樓2013-12-24 01:20:13
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