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xiao寧

新蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] 做完酶切，之后進(jìn)行連接，轉(zhuǎn)化，可是過(guò)夜之后平板上不長(zhǎng)菌落，陰性對(duì)照也不長(zhǎng)菌落已有3人參與

我的酶切體系是  PLL3.7質(zhì)粒（293.8ng/ul）  3ul
                        XhoI                         0.5ul
                     HpaI                         0.5ul
                     buffer                         1ul
                     H2O                            5ul
混合 37℃水浴  3h
進(jìn)行0.7 %瓊脂糖凝膠電泳，切膠回收連接
連接體系 T4連接酶                1ul    對(duì)照載體    2ul
            干擾片段（1uM）    5ul             H2O    3ul
               載體（6.9ng/ui） 2ul
               buffer                      1ul
               H2O                      1ul
混合 16℃ 過(guò)夜連接次日轉(zhuǎn)化
結(jié)果對(duì)照版上和實(shí)驗(yàn)板上均無(wú)菌落出現(xiàn)
這樣的結(jié)果以出現(xiàn)好長(zhǎng)時(shí)間求高人指教

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1樓 2013-12-28 11:22:52

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xiao寧

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引用回帖:

4樓: Originally posted by lxyzsx at 2013-12-28 16:46:04
對(duì)照板是什么？做個(gè)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)化

對(duì)照板指的是酶切的質(zhì)粒和水

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7樓2013-12-29 11:20:02

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cicelyzh

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載體濃度是不是太低了？確定回收到載體片段了嗎？做連接的載體用量在50ng為宜。

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2樓2013-12-28 13:27:04

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lvbobo823

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-28 20:59:21

換個(gè)連接酶試試，我實(shí)驗(yàn)室有段時(shí)間連不上，換了新酶就連好了。

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hehe

3樓2013-12-28 15:57:12

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lxyzsx

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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+1, 鼓勵(lì)交流！ 2013-12-28 20:59:29

對(duì)照板是什么？做個(gè)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)化

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4樓2013-12-28 16:46:04

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