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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » DNA提取相關的問題
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xinr2010金蟲 (小有名氣)
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DNA提取相關的問題 已有3人參與
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試劑盒提取組織DNA，最后一步要換新管后再用TE收集DNA。忘記換新管了，直接在原來的離心管里用TE收集了，這種情況該怎么處理��？ 急急急！！~！謝謝了！ |
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yang0071
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2樓2014-01-01 17:01:56
yudaoqian88
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【答案】應助回帖
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 舊管子里應該主要是鹽離子和酒精污染，個人感覺洗脫下來的DNA直接做一般的PCR模板是不會有影響的，因為一般的PCR要稀釋模板，且反應體系中模板量加的很少，基本可以忽略殘留的酒精及鹽離子對酶活的影響，如果就是為了擴增做模板的話，可以直接用如果不放心，可以用三樓的方式沉淀下來，就是用2.5倍體積的酒精或者等體積的異丙醇沉淀DNA，然后高速離心收集DNA，用70%的酒精洗滌沉淀，再次離心（洗滌將導致DNA沉淀懸浮，再次離心可避免將DNA沉淀倒出），棄上清，室溫放置若干分鐘，待酒精揮發(fā)后直接加適量水溶解就可以了！不用把溶解的DNA溶液重新加到柱子里洗滌、洗脫。因為柱子吸附DNA是有條件的，高鹽低PH條件下柱子吸附DNA，相反的條件DNA就被洗脫下來，如果直接這樣再上柱子，吸附效果不好，產(chǎn)量可能會很低！樓主可以試試！祝樓主成功！ |
3樓2014-01-01 19:40:36
wangweijian
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4樓2014-01-01 19:54:46
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