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xinr2010金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
DNA提取相關(guān)的問(wèn)題 已有3人參與
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試劑盒提取組織DNA，最后一步要換新管后再用TE收集DNA。忘記換新管了，直接在原來(lái)的離心管里用TE收集了，這種情況該怎么處理��？ 急急急��！~！謝謝了！ |
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yudaoqian88
至尊木蟲(chóng) (知名作家)
不良人
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【答案】應(yīng)助回帖
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kx444555: 金幣+4, 鼓勵(lì)交流 2014-01-02 08:35:46
xinr2010: 金幣+10, ★★★★★最佳答案, 謝謝你, 學(xué)了不少東西! 2014-01-05 14:13:17
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 舊管子里應(yīng)該主要是鹽離子和酒精污染，個(gè)人感覺(jué)洗脫下來(lái)的DNA直接做一般的PCR模板是不會(huì)有影響的，因?yàn)橐话愕腜CR要稀釋模板，且反應(yīng)體系中模板量加的很少，基本可以忽略殘留的酒精及鹽離子對(duì)酶活的影響，如果就是為了擴(kuò)增做模板的話(huà)，可以直接用如果不放心，可以用三樓的方式沉淀下來(lái)，就是用2.5倍體積的酒精或者等體積的異丙醇沉淀DNA，然后高速離心收集DNA，用70%的酒精洗滌沉淀，再次離心（洗滌將導(dǎo)致DNA沉淀懸浮，再次離心可避免將DNA沉淀倒出），棄上清，室溫放置若干分鐘，待酒精揮發(fā)后直接加適量水溶解就可以了！不用把溶解的DNA溶液重新加到柱子里洗滌、洗脫。因?yàn)橹游紻NA是有條件的，高鹽低PH條件下柱子吸附DNA，相反的條件DNA就被洗脫下來(lái)，如果直接這樣再上柱子，吸附效果不好，產(chǎn)量可能會(huì)很低！樓主可以試試！祝樓主成功！ |
3樓2014-01-01 19:40:36
yang0071
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4樓2014-01-01 19:54:46
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