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[求助] 不同載體上的GFP序列是否一樣已有5人參與

最近在構(gòu)載體，想帶上GFP標(biāo)簽，實(shí)驗(yàn)室已有的質(zhì)粒上的GFP序列不清楚，不同的載體上GFP序列一樣嗎？可以在NCBI上查到嗎？因?yàn)槟康幕蚝虶FP只能分步連到酵母表達(dá)載體上去，感覺沒有GFP序列怎么設(shè)計(jì)引物？小白一個(gè)，特求助還請(qǐng)懂的人指點(diǎn)一下

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1樓 2014-01-05 10:47:29

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引用回帖:

4樓: Originally posted by gyesang at 2014-01-05 16:05:58
你具體是什么載體呢？...

額，GFP應(yīng)該是在瞬轉(zhuǎn)表達(dá)載體上的，我找了找老師的博士論文上寫的pT-GFP-MCS-COLD6最后連的是目的基因，我也不太懂這個(gè)是什么載體�，F(xiàn)在就是想把它連同GFP轉(zhuǎn)到酵母表達(dá)載體上，因?yàn)槊盖形稽c(diǎn)不一樣，沒法直接切下來就酶連，現(xiàn)在就是不知道GFP序列，一籌莫展

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5樓2014-01-05 16:49:48

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隨風(fēng)飄搖11: 金幣+2, ★有幫助, 因?yàn)槲逸d體上的GFP序列不知道，但是想用這個(gè)作為模板擴(kuò)，這樣的話沒有序列，引物該怎么設(shè)計(jì)？ 2014-01-05 11:01:31
myprayer: 金幣+1, 鼓勵(lì)發(fā)帖積極交流。 2014-01-05 12:43:40

很一樣，RFP等相關(guān)蛋白開始序列基本一樣，只在中間有差別

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我選擇，我喜歡；我喜歡我的選擇。

2樓2014-01-05 10:56:09

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gyesang

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隨風(fēng)飄搖11: 金幣+2, ★有幫助, 看了，發(fā)現(xiàn)有些不一樣。最主要就是我手里有的載體上的GFP序列不知道 2014-01-05 15:43:39

你可以下載幾個(gè)帶GFP的質(zhì)粒的序列，然后自己比對(duì)看看，然后用你手頭上已有的GFP序列為模板設(shè)計(jì)引物，

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3樓2014-01-05 15:20:26

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引用回帖:

3樓: Originally posted by gyesang at 2014-01-05 15:20:26
你可以下載幾個(gè)帶GFP的質(zhì)粒的序列，然后自己比對(duì)看看，然后用你手頭上已有的GFP序列為模板設(shè)計(jì)引物，

你具體是什么載體呢？

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4樓2014-01-05 16:05:58

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隨風(fēng)飄搖11: 金幣+2, ★有幫助, 沒有圖，打算下午去問老師了，問了實(shí)驗(yàn)室的師兄師姐們也都不清楚 2014-01-06 10:32:06

有質(zhì)粒圖嗎？測(cè)個(gè)序就知道序列了，不用犯愁的。

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6樓2014-01-06 10:09:28

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huguangdong

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隨風(fēng)飄搖11: 金幣+2, ★有幫助, 我在NCBI上查了，不同載體上GFP序列不太一樣。謝謝你 2014-01-06 12:03:15

GFP不論是真核或者原核中序列都一樣。

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7樓2014-01-06 10:49:29

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ixido

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隨風(fēng)飄搖11: 金幣+2, ★有幫助, 嗯，謝謝。打算去問老師，載體是老師給的 2014-01-06 12:02:01

還是建議測(cè)序，盡管GFP序列基本上是一樣的，但是有些GFP的序列可能經(jīng)過優(yōu)化或者為了特定的用途進(jìn)行過突變。

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8樓2014-01-06 11:41:50

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7樓: Originally posted by huguangdong at 2014-01-06 10:49:29
GFP不論是真核或者原核中序列都一樣。

氨基酸必定是一樣的，密碼子可能會(huì)有所不同，兼并性而已。不同物種核苷酸偏好不同。

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9樓2014-01-06 17:24:43

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9樓: Originally posted by huguangdong at 2014-01-06 17:24:43
氨基酸必定是一樣的，密碼子可能會(huì)有所不同，兼并性而已。不同物種核苷酸偏好不同。
...

是這樣的，我要從載體上擴(kuò)GFP，然后連到另一個(gè)載體上，但是不知道他的核苷酸序列，那引物不是不好設(shè)計(jì)嗎？

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10樓2014-01-06 18:24:20

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