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574759350鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
怎樣將兩個基因共表達？
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| 大家好，怎樣將兩個基因插入一個表達載體中讓其反向表達，并且在載體上另插入一個相同的啟動子，大家有沒有做過的？能不能說一下大概的思路，謝謝！ |
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！IRES后面的蛋白的翻譯效率有時候不是太高，這也是個問題 2013-07-06 23:05:48
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| 若欲表達兩個融合的不同的基因，而且由同一個啟動子進行轉(zhuǎn)錄，制造出的mRNA會含有兩個基因的序列，當翻譯第一個基因而碰到終止密碼子時，核糖體會從mRNA上掉下來，造成第二個基因無法表達。解決這個問題的方法是，在兩個基因間加入一個內(nèi)部核糖體進入位點(internal ribosome entry site,IRES)序列，讓第二個基因可由內(nèi)部核糖體進入位點(internal ribosome entry site,IRES)序列處進行翻譯，如此兩個基因就可以同時被翻譯，制造出不同的蛋白質(zhì)。 |
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5747593504樓2013-07-06 22:57:45
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2樓2013-07-06 19:18:56
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gyesang: 金幣+2, 其實這種表達要分原核還是真核表達，真核有IRES，2A連接子等，原核表達可以借鑒pDual系列的載體設(shè)計 2013-07-06 23:04:43
574759350: 金幣+5, ★有幫助 2013-07-07 09:14:01
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574759350: 金幣+5, ★有幫助 2013-07-07 09:14:01
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理論上是可行的。常見的比較典型的例子是在同一個載體上表達抗體的重鏈和輕鏈基因。如質(zhì)粒pComb3 （原文章：A vector for the expression of recombinant monoclonal Fab fragments in bacteria）。 但你要求兩個基因反向表達，有什么特殊原因嗎？ 一般來說，如果是兩個獨立表達的調(diào)控單元，基因的方向的影響不太大。 關(guān)鍵是載體的整體設(shè)計，做一個切實可行的克隆方案，保證計劃的實現(xiàn)。 建議你找一個有較好分子生物學(xué)功底的同學(xué)幫忙設(shè)計。 祝好運！ |
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3樓2013-07-06 22:35:48
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5樓2013-07-06 23:37:40
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kx444555: 金幣+1, 鼓勵交流 2013-07-08 08:57:44
kx444555: 金幣+1, 鼓勵交流 2013-07-08 08:57:44
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舉兩個例子： 1.Purification of GFP fusion proteins from transgenic plant cell cultures http://www.aseanbiotechnology.info/Abstract/21020495.pdf 2.Chaperone-fusion expression plasmid vectors for improved solubility of recombinant proteins in Escherichia coli http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2683908/ |
6樓2013-07-06 23:55:29
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9樓2013-07-07 09:24:56
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