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574759350鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
怎樣將兩個(gè)基因共表達(dá)？
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| 大家好，怎樣將兩個(gè)基因插入一個(gè)表達(dá)載體中讓其反向表達(dá)，并且在載體上另插入一個(gè)相同的啟動(dòng)子，大家有沒有做過的？能不能說一下大概的思路，謝謝！ |
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凌波麗
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5樓2013-07-06 23:37:40
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2樓2013-07-06 19:18:56
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 金幣+2, 其實(shí)這種表達(dá)要分原核還是真核表達(dá)，真核有IRES，2A連接子等，原核表達(dá)可以借鑒pDual系列的載體設(shè)計(jì) 2013-07-06 23:04:43
574759350: 金幣+5, ★有幫助 2013-07-07 09:14:01
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574759350: 金幣+5, ★有幫助 2013-07-07 09:14:01
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理論上是可行的。常見的比較典型的例子是在同一個(gè)載體上表達(dá)抗體的重鏈和輕鏈基因。如質(zhì)粒pComb3 （原文章：A vector for the expression of recombinant monoclonal Fab fragments in bacteria）。 但你要求兩個(gè)基因反向表達(dá)，有什么特殊原因嗎？ 一般來說，如果是兩個(gè)獨(dú)立表達(dá)的調(diào)控單元，基因的方向的影響不太大。 關(guān)鍵是載體的整體設(shè)計(jì)，做一個(gè)切實(shí)可行的克隆方案，保證計(jì)劃的實(shí)現(xiàn)。 建議你找一個(gè)有較好分子生物學(xué)功底的同學(xué)幫忙設(shè)計(jì)。 祝好運(yùn)！ |
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5747593503樓2013-07-06 22:35:48
凌波麗
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！IRES后面的蛋白的翻譯效率有時(shí)候不是太高，這也是個(gè)問題 2013-07-06 23:05:48
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！IRES后面的蛋白的翻譯效率有時(shí)候不是太高，這也是個(gè)問題 2013-07-06 23:05:48
| 若欲表達(dá)兩個(gè)融合的不同的基因，而且由同一個(gè)啟動(dòng)子進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，制造出的mRNA會(huì)含有兩個(gè)基因的序列，當(dāng)翻譯第一個(gè)基因而碰到終止密碼子時(shí)，核糖體會(huì)從mRNA上掉下來，造成第二個(gè)基因無法表達(dá)。解決這個(gè)問題的方法是，在兩個(gè)基因間加入一個(gè)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(internal ribosome entry site,IRES)序列，讓第二個(gè)基因可由內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(internal ribosome entry site,IRES)序列處進(jìn)行翻譯，如此兩個(gè)基因就可以同時(shí)被翻譯，制造出不同的蛋白質(zhì)。 |
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4樓2013-07-06 22:57:45
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