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574759350鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
怎樣將兩個基因共表達(dá)？
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| 大家好，怎樣將兩個基因插入一個表達(dá)載體中讓其反向表達(dá)，并且在載體上另插入一個相同的啟動子，大家有沒有做過的？能不能說一下大概的思路，謝謝！ |
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凌波麗
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gyesang: 金幣+2, 鼓勵回帖交流！IRES后面的蛋白的翻譯效率有時候不是太高，這也是個問題 2013-07-06 23:05:48
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| 若欲表達(dá)兩個融合的不同的基因，而且由同一個啟動子進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，制造出的mRNA會含有兩個基因的序列，當(dāng)翻譯第一個基因而碰到終止密碼子時，核糖體會從mRNA上掉下來，造成第二個基因無法表達(dá)。解決這個問題的方法是，在兩個基因間加入一個內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(internal ribosome entry site,IRES)序列，讓第二個基因可由內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(internal ribosome entry site,IRES)序列處進(jìn)行翻譯，如此兩個基因就可以同時被翻譯，制造出不同的蛋白質(zhì)。 |
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5747593504樓2013-07-06 22:57:45
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2樓2013-07-06 19:18:56
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gyesang: 金幣+2, 其實這種表達(dá)要分原核還是真核表達(dá)，真核有IRES，2A連接子等，原核表達(dá)可以借鑒pDual系列的載體設(shè)計 2013-07-06 23:04:43
574759350: 金幣+5, ★有幫助 2013-07-07 09:14:01
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574759350: 金幣+5, ★有幫助 2013-07-07 09:14:01
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理論上是可行的。常見的比較典型的例子是在同一個載體上表達(dá)抗體的重鏈和輕鏈基因。如質(zhì)粒pComb3 （原文章：A vector for the expression of recombinant monoclonal Fab fragments in bacteria）。 但你要求兩個基因反向表達(dá)，有什么特殊原因嗎？ 一般來說，如果是兩個獨立表達(dá)的調(diào)控單元，基因的方向的影響不太大。 關(guān)鍵是載體的整體設(shè)計，做一個切實可行的克隆方案，保證計劃的實現(xiàn)。 建議你找一個有較好分子生物學(xué)功底的同學(xué)幫忙設(shè)計。 祝好運！ |
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3樓2013-07-06 22:35:48
凌波麗
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5樓2013-07-06 23:37:40
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kx444555: 金幣+1, 鼓勵交流 2013-07-08 08:57:44
kx444555: 金幣+1, 鼓勵交流 2013-07-08 08:57:44
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舉兩個例子： 1.Purification of GFP fusion proteins from transgenic plant cell cultures http://www.aseanbiotechnology.info/Abstract/21020495.pdf 2.Chaperone-fusion expression plasmid vectors for improved solubility of recombinant proteins in Escherichia coli http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2683908/ |
6樓2013-07-06 23:55:29
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9樓2013-07-07 09:24:56
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