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jza63鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
融合PCR詳細(xì)步驟 已有3人參與
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| 請(qǐng)問怎么做融合PCR（重疊延伸PCR），請(qǐng)列出詳細(xì)步驟，萬分感謝 |
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lvbobo823
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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4樓2014-03-02 20:43:28
shiyiyaya
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-03-02 15:46:04
jza63: 金幣+10 2014-03-14 16:06:39
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jza63: 金幣+10 2014-03-14 16:06:39
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好，來相助一把。 在重疊的一段設(shè)計(jì)一對(duì)完全互補(bǔ)的引物（P1-Reverse和P2-Forward）。 1. 使用引物P1-Forward，P1-Reverse擴(kuò)增片段Segment1；使用引物P2-Forward，P2-Reverse擴(kuò)增片段Segment2. 2. 取一些第一輪PCR產(chǎn)物（5ul/25ul即可），重新加入Taq酶和dNTPs，buffer等，延伸一輪，15min左右。 3. 加入P1-Forward和P2-Reverse，進(jìn)行第二輪PCR。 4.產(chǎn)物回收。 應(yīng)該可以，具體細(xì)節(jié)根據(jù)你的引物和片段來定。 |
2樓2014-03-01 21:27:47
jza63
鐵蟲 (初入文壇)
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3樓2014-03-02 20:01:57
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5樓2014-03-02 23:25:20
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