| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 13511 | 回復(fù): 8 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖,點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
jza63鐵蟲(chóng) (初入文壇)
|
[求助]
融合PCR詳細(xì)步驟 已有3人參與
|
|
| 請(qǐng)問(wèn)怎么做融合PCR(重疊延伸PCR),請(qǐng)列出詳細(xì)步驟,萬(wàn)分感謝 |
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
好,來(lái)相助一把。 在重疊的一段設(shè)計(jì)一對(duì)完全互補(bǔ)的引物(P1-Reverse和P2-Forward)。 1. 使用引物P1-Forward,P1-Reverse擴(kuò)增片段Segment1;使用引物P2-Forward,P2-Reverse擴(kuò)增片段Segment2. 2. 取一些第一輪PCR產(chǎn)物(5ul/25ul即可),重新加入Taq酶和dNTPs,buffer等,延伸一輪,15min左右。 3. 加入P1-Forward和P2-Reverse,進(jìn)行第二輪PCR。 4.產(chǎn)物回收。 應(yīng)該可以,具體細(xì)節(jié)根據(jù)你的引物和片段來(lái)定。 |
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|