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[求助]
有關(guān)重疊PCR的問題求指導(dǎo)，謝謝。。 已有2人參與
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我想將一段400bp DNA片段與一段3500bp DNA連接，請(qǐng)問重疊pcr適合嗎？有什么要注意的？文獻(xiàn)上說做重疊pcr的兩條片段需大小接近，我這種情況是不是不適合使用重疊pcr？ 還望蟲友指導(dǎo)下，謝謝啦�。�！ |
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Neo2000
木蟲 (著名寫手)
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4樓2014-04-09 12:37:27
d00614028
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 可以的，我曾經(jīng)做過4K與200bp的overlap，設(shè)計(jì)引物的時(shí)候注意點(diǎn)，在設(shè)置overlap引物的時(shí)候，假設(shè)A與B overlap，將A的反向引物設(shè)置到60bp，30bp是A上面的，30bp是B上的，B的正向引物是A的反向引物的反向互補(bǔ)序列，也就是最終的overlap區(qū)能達(dá)到60bp，不知道這樣描述你懂了沒？ |
2樓2014-04-09 09:43:03
3樓2014-04-09 11:16:01
5樓2014-04-09 12:50:30
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