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檸檬可樂(lè)星新蟲(chóng) (小有名氣)
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PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果差 求分析 已有6人參與
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各位大神：我之前做了個(gè)PCR，電泳結(jié)果如下圖（條帶從左到右依次是1、2、3、4），1、2是18S，約1kb，3、4是28S，約700bp，其中1、3是同一個(gè)DNA模板，2、4是同一個(gè)的。我看主帶清晰也挺亮的，就直接送華大測(cè)序了，結(jié)果出來(lái)沒(méi)有一個(gè)成功的，華大反饋的原因是：1：測(cè)序失敗，峰圖質(zhì)量差，可信序列僅100bp；2：雜合，多位點(diǎn)規(guī)則套峰；3：重復(fù)序列，重復(fù)序列后峰圖變亂；4：重復(fù)序列，重復(fù)序列后峰圖變亂。 我想請(qǐng)問(wèn)：1、PCR結(jié)果像我這樣的，測(cè)序結(jié)果卻全部失敗，正常嗎？會(huì)是什么原因？測(cè)序公司的問(wèn)題還是我做的物種的基因問(wèn)題？ 2、搞不清楚他所謂的“重復(fù)序列”是什么情況，有知道的大蝦幫忙分析一下吧。 3、像我這個(gè)情況做克隆后再測(cè)序管用嗎？特別是“重復(fù)序列”的做克隆可以嗎？ 跪求高手指點(diǎn)，感激不盡！！ 圖片1.png |
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d00614028
銀蟲(chóng) (小有名氣)
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PCR產(chǎn)物直接送測(cè)的話(huà)有時(shí)候因?yàn)閷?zhuān)一性的問(wèn)題是可能出現(xiàn)這種現(xiàn)象的。 1，2的反饋的話(huà)，可以做到載體，挑單克隆然后送測(cè)應(yīng)該可以完成。 3，4的反饋的話(huà)，關(guān)于重復(fù)序列，測(cè)序其實(shí)是挺難的，可以讓華大的分析員人工讀峰圖。 |
3樓2014-04-10 16:13:01
stone2239
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4樓2014-04-10 16:29:06
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5樓2014-04-10 19:00:26
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