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[求助]
雙酶切 連接轉(zhuǎn)化問(wèn)題 已有1人參與
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本人利用 雙酶切鏈接一段1Kbp大小的基因到pet-28A載體上 然后熱轉(zhuǎn)到大腸桿菌中 酶切位點(diǎn)選的是Hind III 和Not I 酶切之后的載體和基因都經(jīng)過(guò)切膠回收處理 并且切膠回收之后的樣品進(jìn)行電泳也均有條帶 已經(jīng)多次連接轉(zhuǎn)化 都未成功 PS: 之前這段基因連接成功過(guò) 只是酶切位點(diǎn)選擇有誤 改換酶切位點(diǎn)后就一直連不上了 不知道是不是酶切位點(diǎn)對(duì)這次的連接的影響 請(qǐng)大家指導(dǎo) O(∩_∩)O謝謝 |
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2樓2014-04-15 20:41:09
無(wú)啟
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
疋蓼丌520(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-04-16 19:36:11
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
疋蓼丌520(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-04-16 19:36:11
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大腸桿菌時(shí)間長(zhǎng)什么的也考慮考慮。切膠回收后的條帶你看看大小是否正確。 酶切位點(diǎn)的話可能會(huì)有影響。在排除酶失效和酶切位點(diǎn)沒(méi)選錯(cuò)的情況下， 1.兩個(gè)酶是同時(shí)切的還是分開(kāi)切的？同時(shí)切的話要看buffer是否可以。 2.Not1是難切，該位點(diǎn)序列是8個(gè)堿基，你用的是哪個(gè)公司的？TAKALA的說(shuō)明書(shū)上是1h，我聯(lián)系過(guò)寶生物的技術(shù)支持，可以嘗試3h,有的人會(huì)酶切過(guò)夜。 |
3樓2014-04-16 09:14:18
4樓2014-04-16 09:49:46
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