 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 767 | 回復(fù): 3 | |||
[求助]
雙酶切 連接轉(zhuǎn)化問題 已有1人參與
|
|
本人利用 雙酶切鏈接一段1Kbp大小的基因到pet-28A載體上 然后熱轉(zhuǎn)到大腸桿菌中 酶切位點選的是Hind III 和Not I 酶切之后的載體和基因都經(jīng)過切膠回收處理 并且切膠回收之后的樣品進行電泳也均有條帶 已經(jīng)多次連接轉(zhuǎn)化 都未成功 PS: 之前這段基因連接成功過 只是酶切位點選擇有誤 改換酶切位點后就一直連不上了 不知道是不是酶切位點對這次的連接的影響 請大家指導(dǎo) O(∩_∩)O謝謝 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有174人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- XhoI和NcoI雙酶切之后連接轉(zhuǎn)化不長克隆
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 雙酶切連接轉(zhuǎn)化后貌似出現(xiàn)自連
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 求助--雙酶切連接構(gòu)質(zhì)粒
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 酶切、連接和轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有9人回復(fù)
- pET28a雙酶切后連接目的基因，什么也不長。。。
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 雙酶切之后，線狀質(zhì)粒的連接問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 酶切酶連轉(zhuǎn)化后單克隆檢測不對
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 雙酶切后目的條帶的疑問？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 載體和酶切片段連接的問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 酶切過DNA片段放了一周還能連接嗎
已經(jīng)有18人回復(fù)
- （侯氏出品）雙酶切連接反應(yīng)之全攻略
已經(jīng)有89人回復(fù)
- 雙酶切，連接，轉(zhuǎn)化問題
已經(jīng)有30人回復(fù)
- 雙酶切粘性末端連接不上
已經(jīng)有21人回復(fù)
- 本人做了雙酶切連接轉(zhuǎn)化，真的真的有想死的心了
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 連接與轉(zhuǎn)化問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 轉(zhuǎn)化克隆的問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- PCR ， 雙酶切，連接問題
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 求助 雙酶切驗證陽性克隆的問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 雙酶切連接表達載體，兩個月都沒做出來，問題到底出在哪里呢~？求指點
已經(jīng)有52人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于酶切產(chǎn)物連接的一點問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】雙酶切的問題哦
已經(jīng)有18人回復(fù)
 |
2樓2014-04-15 20:41:09
無啟
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 2428.1
- 散金: 329
- 紅花: 10
- 帖子: 815
- 在線: 314.5小時
- 蟲號: 1202959
- 注冊: 2011-02-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 病毒、病毒感染與宿主免疫
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
疋蓼丌520(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-04-16 19:36:11
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
疋蓼丌520(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-04-16 19:36:11
|
大腸桿菌時間長什么的也考慮考慮。切膠回收后的條帶你看看大小是否正確。 酶切位點的話可能會有影響。在排除酶失效和酶切位點沒選錯的情況下， 1.兩個酶是同時切的還是分開切的？同時切的話要看buffer是否可以。 2.Not1是難切，該位點序列是8個堿基，你用的是哪個公司的？TAKALA的說明書上是1h，我聯(lián)系過寶生物的技術(shù)支持，可以嘗試3h,有的人會酶切過夜。 |
3樓2014-04-16 09:14:18
4樓2014-04-16 09:49:46
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 疋蓼丌520 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +3 | 鈕恩雪 2026-03-25 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +15 | Zhao anqi 2026-03-22 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +3 | AZMK 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
[考研] 材料277求調(diào)劑 +3 | min3 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +6 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] B區(qū)考研調(diào)劑 +4 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿:南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩，總分289分 +6 | @taotao 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)求調(diào)劑 +6 | Stella_Yao 2026-03-20 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 招08考數(shù)學(xué) +7 | laoshidan 2026-03-20 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +8 | hhhhxn.. 2026-03-23 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)一志愿985，分數(shù)349求調(diào)劑 +6 | zxts12 2026-03-21 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 336化工調(diào)劑 +4 | 王大坦1 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿] 急發(fā)核心期刊論文 +3 | 賢達問津 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 接收2026碩士調(diào)劑(學(xué)碩+專碩) +4 | allen-yin 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +5 | 孅華 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +6 | shansx 2026-03-22 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | Auroracx 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 白QF 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 材料與化工 322求調(diào)劑
+4
|
然11 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] A區(qū)線材料學(xué)調(diào)劑 +5 | 周周無極 2026-03-20 | 5/250 |
|