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summermio新蟲 (初入文壇)
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同源重組陽性單菌落問題 已有2人參與
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最近在做同源重組， 想把一個熒光蛋白的基因整合到大腸桿菌基因組的某個地方里， 用的是 red recombinase. 好不容易篩選到幾個陽性菌落后做菌落PCR， 引物選用construct上下游的各一段基因，可是每個單菌落pcr出來都有兩條帶， 一條大小2kb，恰好是整合進去的結(jié)果，一條是300bp（類似WT的結(jié)果）， 是沒整合進去的意思。 我以為是單菌落不純， 于是用驗證過的陽性單菌落再涂reduction plate， 再挑單菌落pcr得出來的結(jié)果還是混合2kb條帶和300bp條帶的結(jié)果，為啥一個單菌落里會有兩種基因型呢？？？？各位大俠有什么解釋和辦法么，，，好不容易有一個結(jié)果~~~(>_< ~~~ |
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2樓2014-04-30 05:32:16
summermio
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