 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 4963 | 回復: 13 | |||
[求助]
溶解曲線不好熒光定量pcr的數(shù)據(jù)就用不了嗎？ 已有6人參與
|
|||
|
以PCR產(chǎn)物純化后為模板進行熒光定量PCR，目的基因nxrB，如圖 1溶解曲線的這兩個雜峰第一個是二聚體第二個是非特異性擴增是嗎？ 2我退火溫度從55提高一直到這次的63度，引物濃度也減半了（到5uM)可二聚體還是存在，這種情況該怎么優(yōu)化實驗條件？ 3引物序列是根據(jù)文獻上應該說比較成熟了的來合成的，看到些帖子說是污染了，在不重提DNA前提下有哪些地方可以優(yōu)化的呢？ 4擴增曲線看還是可以的，但是不是溶解曲線不好數(shù)據(jù)就完全用不了�。� |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 QPCR 問題簡答 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有68人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 請教熒光定量PCR結果圖？我的這張能看出來什么問題？
已經(jīng)有24人回復
- 交流一下熒光定量溶解曲線的問題
已經(jīng)有8人回復
- 你們的熒光定量檢測引物擴增的標準曲線問題！求指教
已經(jīng)有4人回復
- 請教熒光定量PCR的溶解曲線和擴增曲線
已經(jīng)有4人回復
- 熒光定量PCR擴增曲線怎么成這樣了呢？為什么?
已經(jīng)有15人回復
- 定量PCR實驗中關于標曲和溶解曲線的問題
已經(jīng)有12人回復
- 實時熒光定量pcr，cDNA的加入量會影響結果的準確度嗎？
已經(jīng)有24人回復
- 求助！熒光定量PCR標準曲線制作至少要幾個梯度
已經(jīng)有6人回復
- 絕對定量熒光PCR中做標準曲線的DNA的獲得。
已經(jīng)有10人回復
- 熒光定量PCR與普通PCR
已經(jīng)有12人回復
- 熒光定量溶解曲線怎么回事？
已經(jīng)有11人回復
- 熒光定量PCR-絕對定量
已經(jīng)有4人回復
- QPCR 溶解曲線
已經(jīng)有9人回復
- 熒光定量PCR結果如何處理
已經(jīng)有12人回復
- 熒光定量pcr溶解曲線好幾個峰，但是電泳只有一條目的條帶，怎么回事
已經(jīng)有5人回復
- 定量PCR的熔解曲線分析和PCRmix的選擇
已經(jīng)有6人回復
- 熒光定量PCR實驗技術
已經(jīng)有15人回復
- SYBR熒光定量的溶解曲線
已經(jīng)有10人回復
- 熒光定量PCR擴增曲線的分析
已經(jīng)有7人回復
- 熒光定量PCR標準曲線的建立
已經(jīng)有3人回復
- 熒光定量PCR與普通PCR產(chǎn)物不一樣？
已經(jīng)有6人回復
- 【求助/交流】熒光PCR擴增曲線問題
已經(jīng)有18人回復
- 【求助/交流】熒光定量pcr
已經(jīng)有11人回復
冷雁孤旅
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 39 (小學生)
- 金幣: 3724.6
- 散金: 600
- 紅花: 22
- 帖子: 1767
- 在線: 525.6小時
- 蟲號: 1816501
- 注冊: 2012-05-14
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
★ ★ ★ ★
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵回帖交流 2014-08-20 16:56:40
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵回帖交流 2014-08-20 16:56:40
|
你的圖是有引物二聚體以及非特異信不過擴增。 解決方案： 1.減少酶的用量。 2.稀釋引物濃度，我使用的是200mM.你的濃度太大引物的，你看看你的SYBR I 要求的最佳濃度時多少。 （以上2個步驟可以按照普通PCR來進行摸索 優(yōu)化條件以后在上熒光 這樣節(jié)約試劑） 3.重新設計引物（最根本的方法） 4.稀釋模板濃度，我一般吧普通PCR的產(chǎn)物取用稀釋10-3次方到10-7次方來做。 4.有可能是有分子污染，建議配試劑和加樣在不同房間進行，一次加樣一個槍頭，操作間要是沒條件的話，你可以使用大量酒精噴工作臺，搽干凈桌面。或者是用大量水沖洗工作臺。并且QPCR產(chǎn)物不要亂扔，盡量丟遠點，我一般丟在其他實驗室操作間以外的的垃圾桶。希望對你有用 手打 不容易 祝順利 |
8樓2014-08-08 17:47:21
空谷幽風
金蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 32
- 應助: 13 (小學生)
- 貴賓: 0.05
- 金幣: 1106.1
- 散金: 500
- 紅花: 13
- 帖子: 615
- 在線: 116.5小時
- 蟲號: 714271
- 注冊: 2009-03-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
2樓2014-08-06 11:17:10
jurkat.1640
至尊木蟲 (文壇精英)
- MolEPI: 1
- 應助: 908 (博后)
- 金幣: 17153.2
- 散金: 1654
- 紅花: 121
- 沙發(fā): 41
- 帖子: 14521
- 在線: 2184小時
- 蟲號: 514340
- 注冊: 2008-02-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 病毒學
3樓2014-08-06 11:30:42
songzuowei
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 88 (初中生)
- 金幣: 2666.2
- 散金: 18
- 紅花: 7
- 帖子: 2058
- 在線: 98.5小時
- 蟲號: 2469387
- 注冊: 2013-05-17
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
4樓2014-08-06 12:34:23
7樓2014-08-06 16:41:44
5樓2014-08-06 15:40:55
6樓2014-08-06 16:07:09
9樓2014-08-14 15:07:45
10樓2014-08-14 15:08:37
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 夢夢神 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿北京化工大學0703化學318分，有科研經(jīng)歷，求調劑 +3 | 一瓶苯甲酸 2026-03-14 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 317求調劑 +3 | 申子申申 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學 ，070300化學學碩，總分287，雙非一本，求調劑。 +3 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
[考研] 330求調劑 +3 | 小材化本科 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +5 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調劑，一作一項核心論文五項專利，省、國級證書40+數(shù)一英一287 +8 | 小李0854 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調劑 +8 | 大可digkids 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 268求調劑 +7 | 好運連綿不絕 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 326求調劑 +5 | 上岸的小葡 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085601求調劑 +4 | Du.11 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 333求調劑 +3 | 文思客 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 0703方向310分求調劑 +3 | 努力奮斗112 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿211 285分求調劑 +5 | ly3471z 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求老師收留調劑 +4 | jiang姜66 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 289求調劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-14 | 6/300 |
|
|
|
[基金申請] 現(xiàn)在如何回避去年的某一個專家，不知道名字 +3 | zk200107 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調劑 +5 | 閆旭東 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 295求調劑 +3 | 小匕仔汁 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +3 | 是Lupa啊 2026-03-12 | 3/150 |
|