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夢夢神新蟲 (初入文壇)
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[求助]
溶解曲線不好熒光定量pcr的數(shù)據(jù)就用不了嗎？ 已有6人參與
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以PCR產(chǎn)物純化后為模板進(jìn)行熒光定量PCR，目的基因nxrB，如圖 1溶解曲線的這兩個雜峰第一個是二聚體第二個是非特異性擴(kuò)增是嗎？ 2我退火溫度從55提高一直到這次的63度，引物濃度也減半了（到5uM)可二聚體還是存在，這種情況該怎么優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件？ 3引物序列是根據(jù)文獻(xiàn)上應(yīng)該說比較成熟了的來合成的，看到些帖子說是污染了，在不重提DNA前提下有哪些地方可以優(yōu)化的呢？ 4擴(kuò)增曲線看還是可以的，但是不是溶解曲線不好數(shù)據(jù)就完全用不了啊？ |
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 QPCR 問題簡答 |
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木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1.是的，解決方法：將現(xiàn)有引物稀釋100倍試一下或者重新設(shè)計(jì)引物 2，引物稀釋100倍: 3，可以重新設(shè)計(jì)引物 4，溶解曲線這個樣子說明有非特異性擴(kuò)增，qPCR本身就是非常靈敏的實(shí)驗(yàn)，這個數(shù)據(jù)是不可信的 |
4樓2014-08-06 12:34:23
空谷幽風(fēng)
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3樓2014-08-06 11:30:42
5樓2014-08-06 15:40:55
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