 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1226 | 回復(fù): 4 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
Young-Tiger金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
連接載體一直連不上 已有2人參與
|
|
| 插入片段450bp，要連接的載體有7kb左右，一端平（StuI）一端粘（Bsu36I），濃度設(shè)置上，載體：50ng，載體插入片段摩爾比是1：3；連接酶，NEB的5min Quick Ligase 和promega的3h T4都用過了，還是沒長(zhǎng)出來。昨天一個(gè)關(guān)鍵的對(duì)照是，我用同樣的插入片段同樣的酶切位點(diǎn)連一個(gè)較小的載體（3kb pGEM）連接成功，所以問題總結(jié)后就是，同一個(gè)插入片段連小載體成功連大載體失敗，請(qǐng)高手指點(diǎn)該怎么改進(jìn)。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有205人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 大片段連接大載體難以連接的問題
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 目的片段與表達(dá)載體怎么都連接不上
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 目的片段載體片段連接不長(zhǎng)菌
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 酶切連接連不上，要死了
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 關(guān)于pMD19-T載體連接轉(zhuǎn)化問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 目的片段和載體連接一直不上
已經(jīng)有24人回復(fù)
- 最近實(shí)驗(yàn)室T載體連接一直都假陽性
已經(jīng)有11人回復(fù)
- T載體連接不上去
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 克隆基因?yàn)槭裁匆恢边B不到載體上
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 載體為什么連不上呢
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 片段總是連不到T載體上
已經(jīng)有22人回復(fù)
- DNA片段連接到載體上都有什么方法
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 確定連接時(shí)載體，片段的加入量
已經(jīng)有4人回復(fù)
- T載體連接溫度和時(shí)間
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 目的片段與載體連接后無法檢測(cè)出
已經(jīng)有7人回復(fù)
- PMD19-T載體連接不上428bp的片段
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 載體總是連不上，已經(jīng)一個(gè)月了~真心求助，詳細(xì)在帖子里
已經(jīng)有7人回復(fù)
- pIRES2-EGFP 載體連接目的片段是否困難
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 載體連接pcr片段一直連不上
已經(jīng)有17人回復(fù)
- pUC19-SalI單酶切，連個(gè)2500片段，連不上？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 長(zhǎng)片段DNA如何連接載體
已經(jīng)有21人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物與T載體連不上 求助
已經(jīng)有29人回復(fù)
- 我用的是pMAL-m2載體，片段大小連不上！
已經(jīng)有3人回復(fù)
4樓2014-10-18 10:45:32
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-10-19 18:20:39
Young-Tiger: 金幣+25, ★有幫助 2014-10-20 20:57:56
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-10-19 18:20:39
Young-Tiger: 金幣+25, ★有幫助 2014-10-20 20:57:56
| 樓主的載體最好也要有個(gè)positive control，保證閉環(huán)的載體轉(zhuǎn)然后可以長(zhǎng)出菌落。然后樓主可以試試提高插入片段的比例，片段載體比可以提高到20:1，別擔(dān)心出現(xiàn)串聯(lián)插入，雙酶切出現(xiàn)串聯(lián)插入的可能性很小。祝連接成功！ |
2樓2014-10-18 00:26:53
Young-Tiger
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 801.5
- 散金: 129
- 紅花: 1
- 帖子: 241
- 在線: 99.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1063099
- 注冊(cè): 2010-07-23
- 性別: GG
- 專業(yè): 動(dòng)物遺傳學(xué)
3樓2014-10-18 01:07:03
Young-Tiger
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 801.5
- 散金: 129
- 紅花: 1
- 帖子: 241
- 在線: 99.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1063099
- 注冊(cè): 2010-07-23
- 性別: GG
- 專業(yè): 動(dòng)物遺傳學(xué)
5樓2014-10-18 22:31:54
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
10