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mochenmi

銅蟲 (小有名氣)

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專業(yè): 植物病理學(xué)

[求助] 表達(dá)載體構(gòu)建問題已有1人參與

我想把我的一個目的基因A連入表達(dá)載體中進(jìn)行表達(dá)，也不需要與熒光蛋白基因或者其他的基因進(jìn)行融合表達(dá)，載體上有啟動子跟終止子，是不是只需要設(shè)計(jì)好兩端的酶切位點(diǎn)然后連進(jìn)去就行了，還需要考慮移碼那些問題嗎？老師跟我說要考慮，叫我把啟動子到終止子那一段設(shè)計(jì)引物擴(kuò)出來測序分析，我就不知道怎么分析了。難道不是簡單的從第一個ATG開始嘛？

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1樓 2014-11-15 20:10:42

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guoliwang

至尊木蟲 (職業(yè)作家)

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專業(yè): 生物化學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

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myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-16 19:02:00
myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-16 19:02:20

你的目的基因的起始密碼子必須和載體啟動子的起始密碼子AUG在同一閱讀框，即相差核苷酸的數(shù)目必須是3的整數(shù)倍，而且相差核苷酸數(shù)目越少越好，最理想的狀態(tài)是兩個密碼子重疊。載體的終止密碼子一般不需要考慮，你的目的基因應(yīng)該有自帶終止密碼子的。

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回復(fù)此樓

慎思明辨博學(xué)篤行

2樓2014-11-15 22:09:51

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