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muyuchc木蟲 (小有名氣)
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[求助]
western抗體是怎么識別蛋白一級序列的 已有7人參與
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| 有的western抗體是識別蛋白一級序列的，請問是怎么特異性識別的？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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muyuchc: 金幣+10 2014-11-20 19:17:01
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大多數(shù)情況下，抗體的制備是通過一級序列去制備的。 簡單的回顧下抗體的制備方法 1構(gòu)建表達(dá)載體 2原核表達(dá) 3純化蛋白 4免疫動物制備抗體 發(fā)現(xiàn)沒，經(jīng)過1,2,3步驟，這是原核表達(dá)步驟，原核表達(dá)的蛋白 1沒有活性， 2多肽為主。 因?yàn)樵吮磉_(dá)的蛋白 1缺乏真核表達(dá)所需要的酶，所以無法正確折疊成蛋白 2缺乏真核表達(dá)所需要的內(nèi)環(huán)境，細(xì)胞器等 3原核表達(dá)以包涵體表達(dá)為主，所以，經(jīng)過那么強(qiáng)烈的ph變化和尿素處理最后純化出來的蛋白，有活性才怪，基本上就是條肽鏈 那么，以上問題解決了，答案就很明顯了，你用的一級序列去制備抗體，那么抗體能夠識別的， 自然是一級序列了 然后問題來了，這種情況下，事實(shí)上，抗體是不特異的。所以，極少見那些可以用自己制備抗體做出非常單一漂亮的wb圖片的 所以，如何解決？單克隆抗體嘿嘿，牛一點(diǎn)咋辦，直接從生物里提取活的抗體，那樣最有用，生化危機(jī)啦，猿星崛起啦，都是這么干的。 |
4樓2014-11-19 10:42:55
youlinglyw
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| 針對線性表位的抗體都是特異性地識別一小段肽段的。抗體蛋白有一個特定的三維結(jié)構(gòu)，多肽也有一個特定的三維結(jié)構(gòu)，兩個結(jié)構(gòu)是互補(bǔ)的，碰到一起就相互結(jié)合了。有點(diǎn)類似于手套和手，假設(shè)手套是抗體，手是抗原，兩者湊到一塊之后，在合適的取向下他們就能結(jié)合到一起了。抗體-抗原結(jié)合的原理還涉及變構(gòu)調(diào)節(jié)，這些在分子生物學(xué)和免疫學(xué)里都有描述。 |
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