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muyuchc木蟲 (小有名氣)
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[求助]
western抗體是怎么識(shí)別蛋白一級(jí)序列的 已有7人參與
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| 有的western抗體是識(shí)別蛋白一級(jí)序列的，請(qǐng)問(wèn)是怎么特異性識(shí)別的？ |
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youlinglyw
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【答案】應(yīng)助回帖
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以上內(nèi)容主要是解決了你的標(biāo)題問(wèn)題 然后，問(wèn)，有沒(méi)方法去識(shí)別一級(jí)序列？ a，活性情況下，無(wú)法識(shí)別。這個(gè)如果非要是生物體內(nèi)部的話，自然有方法了，相應(yīng)的酶和結(jié)構(gòu)會(huì)處理的 b，無(wú)活性情況下，可以識(shí)別。簡(jiǎn)單方法就是變性，成為了肽鏈，然后去測(cè)蛋白質(zhì)序列就可以了，1953年，sanger最初就是測(cè)了胰島素序列吧。 現(xiàn)在的話，一般是用打質(zhì)譜然后拼接。 以上內(nèi)容，答非所問(wèn)。 |
5樓2014-11-19 10:52:56
xiaoyugutou 
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2樓2014-11-19 06:07:14
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3樓2014-11-19 10:06:51
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
muyuchc: 金幣+10 2014-11-20 19:17:01
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
muyuchc: 金幣+10 2014-11-20 19:17:01
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大多數(shù)情況下，抗體的制備是通過(guò)一級(jí)序列去制備的。 簡(jiǎn)單的回顧下抗體的制備方法 1構(gòu)建表達(dá)載體 2原核表達(dá) 3純化蛋白 4免疫動(dòng)物制備抗體 發(fā)現(xiàn)沒(méi)，經(jīng)過(guò)1,2,3步驟，這是原核表達(dá)步驟，原核表達(dá)的蛋白 1沒(méi)有活性， 2多肽為主。 因?yàn)樵吮磉_(dá)的蛋白 1缺乏真核表達(dá)所需要的酶，所以無(wú)法正確折疊成蛋白 2缺乏真核表達(dá)所需要的內(nèi)環(huán)境，細(xì)胞器等 3原核表達(dá)以包涵體表達(dá)為主，所以，經(jīng)過(guò)那么強(qiáng)烈的ph變化和尿素處理最后純化出來(lái)的蛋白，有活性才怪，基本上就是條肽鏈 那么，以上問(wèn)題解決了，答案就很明顯了，你用的一級(jí)序列去制備抗體，那么抗體能夠識(shí)別的， 自然是一級(jí)序列了 然后問(wèn)題來(lái)了，這種情況下，事實(shí)上，抗體是不特異的。所以，極少見(jiàn)那些可以用自己制備抗體做出非常單一漂亮的wb圖片的 所以，如何解決？單克隆抗體嘿嘿，牛一點(diǎn)咋辦，直接從生物里提取活的抗體，那樣最有用，生化危機(jī)啦，猿星崛起啦，都是這么干的。 |
4樓2014-11-19 10:42:55
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