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muyuchc木蟲 (小有名氣)
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[求助]
western抗體是怎么識別蛋白一級序列的 已有7人參與
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| 有的western抗體是識別蛋白一級序列的，請問是怎么特異性識別的？ |
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muyuchc
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muyuchc: 金幣+10 2014-11-20 19:17:01
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大多數(shù)情況下，抗體的制備是通過一級序列去制備的。 簡單的回顧下抗體的制備方法 1構建表達載體 2原核表達 3純化蛋白 4免疫動物制備抗體 發(fā)現(xiàn)沒，經(jīng)過1,2,3步驟，這是原核表達步驟，原核表達的蛋白 1沒有活性， 2多肽為主。 因為原核表達的蛋白 1缺乏真核表達所需要的酶，所以無法正確折疊成蛋白 2缺乏真核表達所需要的內環(huán)境，細胞器等 3原核表達以包涵體表達為主，所以，經(jīng)過那么強烈的ph變化和尿素處理最后純化出來的蛋白，有活性才怪，基本上就是條肽鏈 那么，以上問題解決了，答案就很明顯了，你用的一級序列去制備抗體，那么抗體能夠識別的， 自然是一級序列了 然后問題來了，這種情況下，事實上，抗體是不特異的。所以，極少見那些可以用自己制備抗體做出非常單一漂亮的wb圖片的 所以，如何解決？單克隆抗體嘿嘿，牛一點咋辦，直接從生物里提取活的抗體，那樣最有用，生化危機啦，猿星崛起啦，都是這么干的。 |
4樓2014-11-19 10:42:55
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5樓2014-11-19 10:52:56
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