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重組PCR 擴(kuò)不出來需要的條帶
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總是出現(xiàn)不了需要的條帶。雜帶很多也很亮。 一個(gè)片段是EGFP基因（750bp），另一個(gè)片段長2.6kb。兩個(gè)片段重疊15bp。 各自PCR之后切膠回收測濃度。按照摩爾比1:1加的模板。重組PCR的時(shí)候是先進(jìn)行一輪8個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增（退火溫度50℃），加Phusion酶不加引物。之后加引物進(jìn)行第二輪擴(kuò)增，退火溫度從50到70的梯度。結(jié)果出來就是圖片上這樣。應(yīng)該在3.4k左右有條帶出現(xiàn)的。 引物一條是34個(gè)堿基 另一條60個(gè)堿基 Marker是250bp ladder 從上往下依次是5k 3k 2k 1.5k 1k 750 500 250 100 求賜教。第一次做重組PCR，不太了解哪里出問題了。 20141124重組PCR.jpg |
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煉水燎原
新蟲 (小有名氣)
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