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[交流] 雙酶切，第一個(gè)大小片段都很亮，但是第二個(gè)小片段有些彌散，是為什么啊？

我做的兩個(gè)基因的雙酶切，切了一天一夜，第一個(gè)大小片段都很亮，但是第二個(gè)小片段有些彌散且模糊不亮，是為什么��？DL2000的MAKER.

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1樓 2014-12-17 10:07:00

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我切的是質(zhì)粒，求幫助啊，是因?yàn)橘|(zhì)粒提的不好嗎

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2樓2014-12-17 10:17:08

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marker沒(méi)有跑開(kāi)，酶切的第二段大小是多少？

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3樓2014-12-17 14:26:56

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3樓: Originally posted by hajierlove at 2014-12-17 14:26:56
marker沒(méi)有跑開(kāi)，酶切的第二段大小是多少？

600多bp啊，什么原因呢

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4樓2014-12-17 15:20:36

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什么酶切位點(diǎn) 怎么切了24小時(shí)？

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5樓2014-12-17 16:54:29

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5樓: Originally posted by 嘿小楊同志 at 2014-12-17 16:54:29
什么酶切位點(diǎn) 怎么切了24小時(shí)？

sal和not1

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6樓2014-12-17 20:25:34

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酶切反應(yīng)一般2小時(shí)內(nèi)完成，如果模板很多的話(huà)可以相應(yīng)增加酶切時(shí)間，但最好不要超過(guò)8小時(shí)。

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7樓2014-12-17 20:27:36

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7樓: Originally posted by witake at 2014-12-17 20:27:36
酶切反應(yīng)一般2小時(shí)內(nèi)完成，如果模板很多的話(huà)可以相應(yīng)增加酶切時(shí)間，但最好不要超過(guò)8小時(shí)。

切的太久會(huì)造成拖尾嗎

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8樓2014-12-17 20:51:58

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切得太久有些酶會(huì)亂切質(zhì)粒本身也會(huì)降解

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9樓2014-12-17 21:21:45

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質(zhì)粒雙酶切，大小片段的摩爾比是1:1，所以大片段肯定是比小片段亮的

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10樓2014-12-18 16:28:47

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