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有關(guān)測(cè)序問題，為什么送菌液不直接送PCR產(chǎn)物 已有9人參與
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| 做基因的，為什么要割膠回收，連接轉(zhuǎn)化搖菌后送菌液，而不是直接用前面的PCR產(chǎn)物呢 |
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ls2046
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
qaz139687: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 非常有幫助 2015-01-04 16:40:08
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| 在測(cè)序的過程中，兩端各有20-50bp，是無法準(zhǔn)確閱讀的，參考性比較低，這是測(cè)序技術(shù)本身存在的問題，無法避免。連接載體后，使用載體上的序列作為測(cè)序引物，那么你的片段就能夠讀全了（可靠性低的序列會(huì)位于在載體上）。如果基因兩端的局部序列正確與否對(duì)你對(duì)結(jié)果的判斷沒有影響的話，完全可以用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序（測(cè)序公司都要的），相反，則需要連接載體并用載體上的引物進(jìn)行測(cè)序。我們做菌種大批量鑒定時(shí)都是使用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序。因此，是連接載體還是用PCR產(chǎn)物，主要是看你測(cè)序的目的。ok。 |
6樓2015-01-04 09:30:22
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3樓2015-01-03 09:48:09
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10樓2015-01-04 11:00:45
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