 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3355 | 回復(fù): 23 | ||
berry94鐵蟲 (初入文壇)
|
[求助]
高GC含量目的基因的克隆 已有14人參與
|
|
| 大家好，我要克隆一個(gè)1.2K的目的基因，GC含量70%，克隆了很長(zhǎng)時(shí)間了，一直沒(méi)有什么進(jìn)展，特地來(lái)向前輩們求助。個(gè)人認(rèn)為RNA提取應(yīng)該是很好的，一直覺(jué)著反轉(zhuǎn)錄得不好，我用的promega A5000的反轉(zhuǎn)錄試劑盒，48度、50度反轉(zhuǎn)過(guò)，都沒(méi)有擴(kuò)出條帶，做RACE也沒(méi)有得到結(jié)果，所以希望有經(jīng)驗(yàn)者提下意見(jiàn)，讓晚輩進(jìn)步！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有248人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 克隆目的基因的問(wèn)題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 高CG重復(fù)和連續(xù)序列怎么P出來(lái)
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 如何確定自己的目的片段 PCR 痛苦中
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 克隆轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化子就是不含目的基因。
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 多克隆酶切位點(diǎn)可以任意插入基因嗎？不用考慮啟動(dòng)子的距離嗎？
已經(jīng)有8人回復(fù)
- PCR引物必須與目的基因片段的一小段序列互補(bǔ)嗎？急�。。�
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 如何擴(kuò)增GC含量較高的片段
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助】如何得到某一物種的所有蛋白翻譯基因的不同位置（exon、intron）的GC含量
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 兩個(gè)基因片段的連接問(wèn)題？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 已有基因組文庫(kù)，求目的基因全序列的克隆子
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 真菌的基因克隆與表達(dá) 為什么要去除內(nèi)含子？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 關(guān)于GC含量高的模板
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 高GC含量基因片段PCR問(wèn)題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 1.5kb的 PCR目的序列GC含量高達(dá)67%，引物Tm值達(dá)90℃，怎么P比較好？
已經(jīng)有16人回復(fù)
- GC含量測(cè)定相關(guān)問(wèn)題，請(qǐng)教大家一下�。。�
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 已知全長(zhǎng)基因怎樣克隆并構(gòu)建表達(dá)載體
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】高GC含量的模板，請(qǐng)問(wèn)多少含量就算高呢？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】低GC含量的模板設(shè)計(jì)引物
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于目的基因的克隆
已經(jīng)有12人回復(fù)
15樓2015-01-07 11:46:07
18樓2015-01-07 16:43:36
18761615793
木蟲 (正式寫手)
小蟲
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 172 (高中生)
- 金幣: 646.4
- 散金: 170
- 紅花: 16
- 帖子: 863
- 在線: 144.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 3603131
- 注冊(cè): 2014-12-19
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
|
GC含量那么高，而且又是1200bp的模板，普通酶應(yīng)該擴(kuò)增不出來(lái)，最好是使用專門用于長(zhǎng)片段擴(kuò)增的酶，也不要盲目的只選擇高保真酶，畢竟高保真酶還是保真性居首位，不一定能對(duì)長(zhǎng)片段的進(jìn)行擴(kuò)增啊。 對(duì)于高GC的模板，優(yōu)化是一定不能少的，如果你購(gòu)買的試劑盒中有直接是供高GC擴(kuò)增的buffer的話，是最好的，這樣就不用額外進(jìn)行鎂離子、DMSO的優(yōu)化了，操作起來(lái)簡(jiǎn)單方便的，如果有熱啟動(dòng)又長(zhǎng)片段擴(kuò)增的 最好不過(guò)了 （現(xiàn)在市場(chǎng)上極少極少的） 選酶是關(guān)鍵，buffer也是關(guān)鍵 希望有所幫助哦 |
19樓2015-01-08 11:51:37
20樓2015-01-08 15:22:07
YANJL
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 318.8
- 散金: 20
- 帖子: 19
- 在線: 9.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 1591861
- 注冊(cè): 2012-01-30
- 專業(yè): 植物生理與生化
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
berry94: 金幣+3, ★★★很有幫助 2015-01-06 10:56:52
berry94: 回帖置頂 2015-01-06 10:57:02
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
berry94: 金幣+3, ★★★很有幫助 2015-01-06 10:56:52
berry94: 回帖置頂 2015-01-06 10:57:02
| 我做的基因就是GC含量很高的，如果你懷疑反轉(zhuǎn)錄有問(wèn)題，你可以用一段小一點(diǎn)的比較好P的引物來(lái)試一下能不能P出來(lái)，我P的時(shí)候都會(huì)加DMSO幫助解鏈，然后我感覺(jué)引物的設(shè)計(jì)也很重要，個(gè)人體會(huì)，用的兩對(duì)引物，一對(duì)就怎么也p不出來(lái)，然后換了一對(duì)引物就很輕松的p出來(lái)了，用的GXL |
6樓2015-01-06 09:05:35
lanhongxia
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 51.8
- 帖子: 16
- 在線: 10.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 1654669
- 注冊(cè): 2012-03-01
- 性別: MM
- 專業(yè): 細(xì)胞呼吸與代謝
8樓2015-01-06 13:00:11
loganfan
銀蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 10 (幼兒園)
- 金幣: 4888.1
- 散金: 61
- 紅花: 2
- 帖子: 772
- 在線: 145.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 1392968
- 注冊(cè): 2011-09-06
- 專業(yè): 免疫學(xué)研究新技術(shù)與新方法
10樓2015-01-06 16:47:43
2樓2015-01-04 20:40:19
3樓2015-01-05 09:12:45
berry94
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 10
- 散金: 10
- 帖子: 36
- 在線: 8.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 2877739
- 注冊(cè): 2013-12-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)與分化
4樓2015-01-05 16:53:34
berry94
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 10
- 散金: 10
- 帖子: 36
- 在線: 8.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 2877739
- 注冊(cè): 2013-12-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)與分化
5樓2015-01-05 16:55:02
berry94
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 10
- 散金: 10
- 帖子: 36
- 在線: 8.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 2877739
- 注冊(cè): 2013-12-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)與分化
7樓2015-01-06 10:52:00
berry94
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 10
- 散金: 10
- 帖子: 36
- 在線: 8.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 2877739
- 注冊(cè): 2013-12-17
- 性別: MM
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)與分化
9樓2015-01-06 15:10:34
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 berry94 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +7 | 梁茜雯 2026-03-19 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 280分求調(diào)劑 一志愿085802 +4 | PUMPT 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 +3 | α____ 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +11 | 冷笙123 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +4 | 幸運(yùn)的醬醬 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 287求調(diào)劑 +8 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +5 | 我愛(ài)生物生物愛(ài)?/a> 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +7 | 懷瑾握瑜l 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +7 | Tyoumou 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工306 +4 | z1z2z3879 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿深大，0703化學(xué)，總分302，求調(diào)劑 +4 | 七月-七七 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | www_q 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +4 | 某某某某位 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | .m.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 22 350 本科985求調(diào)劑，求老登收留 +3 | 李軼男003 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +6 | △小透明* 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南師大 070300（化學(xué)）304分求調(diào)劑 +3 | 0703武芊慧雪304 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +7 | z1z2z3879 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿武漢理工材料工程專碩調(diào)劑 +9 | Doleres 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
 材料與化工 322求調(diào)劑
+4
|
然11 2026-03-19 | 4/200 |
|