 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 7445 | 回復(fù): 32 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
moshangchenx金蟲(chóng) (正式寫手)
|
[求助]
目的片段一端是粘性末端,一端是平末端與相應(yīng)載體的連接如何提高效率?急! 已有12人參與
|
|
|
我最近在做一個(gè)片段與載體的連接構(gòu)建一個(gè)質(zhì)粒,連了很多次都沒(méi)連上. 具體如下:我的目的片段一端是粘性末端(Spe I 酶切位點(diǎn)),一端是平末端(SMA I 酶切位點(diǎn)).片段是PCR后連在T載體上測(cè)序正確,雙酶切效果可以切出兩條相應(yīng)大小的片段.載體是pDBLeu,內(nèi)含Spe I 與SMA I 酶切位點(diǎn).其雙酶切出的片段與未酶切的片段有電泳大小的區(qū)別.目的片段與載體我都雙酶切后進(jìn)行膠回收用去離子水溶解.回收產(chǎn)物電泳可看到模糊條帶. 我做了十幾次片段與載體不同濃度的連接,Takara Solutiuon I 、TIANGEN的T4DNA連接酶進(jìn)行16度過(guò)夜連接以及用PCR儀進(jìn)行過(guò)夜變溫連接,用未酶切的pDBLeu質(zhì)粒做陽(yáng)性對(duì)照.結(jié)果,陽(yáng)性對(duì)照的平板上每次都產(chǎn)生很多菌落,但做連接的板上一個(gè)菌落都沒(méi)有.載體雙酶切后片段長(zhǎng)9800多bp，目標(biāo)片段為1800多bp。 做了很多次了都如此,都快做的沒(méi)信心做下去了,有哪個(gè)大哥大姐給我一些建設(shè)性意見(jiàn)嗎?多謝了!!! |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有237人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- Taq 酶擴(kuò)增的片段能連接平末端載體嗎
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 一端為黏性末端一端為平末端的連接方法
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 粘性末端老是連接不上
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 粘性末端連接時(shí)長(zhǎng)問(wèn)題
已經(jīng)有27人回復(fù)
- 平端酶與粘性末端酶一起使用，產(chǎn)物能否與目標(biāo)片段一起鏈接呢？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 合成的引物直接退火形成粘性末端后連入載體
已經(jīng)有13人回復(fù)
- BamHI,SmaI平末端粘性末端連接問(wèn)題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 平末端加A尾連接T載體的問(wèn)題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 一個(gè)平末端和粘性末端怎樣連接比較好
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 雙酶切粘性末端連接不上
已經(jīng)有21人回復(fù)
- DNA片段經(jīng)過(guò)酶切后的粘性末端怎么磨平？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】酶切后的粘性末端補(bǔ)平
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】粘性末端連接問(wèn)題
已經(jīng)有12人回復(fù)
moshangchenx
金蟲(chóng) (正式寫手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1913.7
- 散金: 7
- 紅花: 1
- 帖子: 345
- 在線: 69.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1573517
- 注冊(cè): 2012-01-11
- 專業(yè): 認(rèn)知科學(xué)
7樓2015-01-12 10:13:07
moshangchenx
金蟲(chóng) (正式寫手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1913.7
- 散金: 7
- 紅花: 1
- 帖子: 345
- 在線: 69.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1573517
- 注冊(cè): 2012-01-11
- 專業(yè): 認(rèn)知科學(xué)
2樓2015-01-12 09:08:50
moshangchenx
金蟲(chóng) (正式寫手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1913.7
- 散金: 7
- 紅花: 1
- 帖子: 345
- 在線: 69.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1573517
- 注冊(cè): 2012-01-11
- 專業(yè): 認(rèn)知科學(xué)
3樓2015-01-12 09:18:38
4樓2015-01-12 10:00:14
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +5 | BrightLL 2026-03-29 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 349求調(diào)劑 +6 | 李木子啊哈哈 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑考研 +3 | 王杰一 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +7 | 江辭666 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 一志愿廈門大學(xué)化學(xué)學(xué)碩307求調(diào)劑
+10
|
y7czhao 2026-03-26 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿9，初試成績(jī)：338，四六級(jí)已過(guò)，有科研經(jīng)歷，求調(diào)劑！ +4 | Zuhui0306 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856，材料與化工321分求調(diào)劑 +12 | 大饞小子 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 339求調(diào)劑，想調(diào)回江蘇 +6 | 烤麥芽 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +5 | jhx777 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 330一志愿中國(guó)海洋大學(xué) 化學(xué)工程 085602 有讀博意愿 求調(diào)劑 +3 | wywy.. 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +4 | AZMK 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 26申博 +3 | 加油沖啊！ 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調(diào)劑 +5 | 李瀟可 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑323材料與化工 +7 | 1124361 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 343求調(diào)劑 +4 | 贈(zèng)我一本書 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 085602化學(xué)工程求調(diào)劑。
+4
|
平樂(lè)樂(lè)樂(lè) 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械學(xué)碩總分317求調(diào)劑！�。。� +4 | Acaciad 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 290分調(diào)劑求助 +3 | 吉祥止止陳 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 錦衣衛(wèi)藤椒 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 【2026考研調(diào)劑】制藥工程 284分 求相關(guān)專業(yè)調(diào)劑名額 +4 | 袁奐奐 2026-03-25 | 8/400 |
|