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maweisimple鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
熒光PCR 內(nèi)控
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| 大家好,最近在思考,實時熒光PCR的試劑往往除了陽性質(zhì)控品,還添加另一種熒光信號的內(nèi)控,有些不解,陽性質(zhì)控品不就是證明試劑沒問題的嗎,如果陽性質(zhì)控有信號,外控無信號,說明提取的樣本有抑制,而反應試劑是沒問題,為什么還要加內(nèi)控呢?請大家各抒己見,不吝賜教! |
QPCR 問題簡答 |

| 陽性質(zhì)控,是為了說明你的試劑沒有問題,由于陽性質(zhì)控并不和你的具體的每一個樣本一管擴增。而有時候某個樣本是陰性,但是你無法判斷是由于真的是陰性呢還是標本有抑制物導致的陰性,這時候就引入內(nèi)控,也就是所謂的內(nèi)標,它分兩種,一種是管家基因,一種是額外添加進去的質(zhì);蛘咂渌ㄕ5臉颖緝(nèi)控或內(nèi)標就肯定為陽性),和樣本一起參與提取,這時候如果標本的目的片段是陰性,而內(nèi)標也是陰性,說明這個標本可能有抑制物,因為連內(nèi)標都沒有出來,可以稀釋下臨床樣本進行檢測,而如果標本的目的片段是陰性,而內(nèi)標是陽性,那么結(jié)果為正常,即,此份樣本你的目的片段為陰性,不知道這樣解釋你是否明白。內(nèi)標主要用來考察樣本擴增的假陰性! |
銅蟲 (小有名氣)
鐵蟲 (小有名氣)

鐵蟲 (小有名氣)

銅蟲 (小有名氣)
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測定的DNA是你提取的總DNA,未必含有你外標那段基因(當然也只有極端的情況才會出現(xiàn)這種情況),這個時候引入的各種陽性質(zhì)控、外標以及內(nèi)標才能發(fā)揮它們的作用,輔助你分析問題所在。不知道這樣解釋能否幫助你? |
鐵蟲 (小有名氣)

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