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maweisimple鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
熒光PCR 內(nèi)控
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| 大家好，最近在思考，實(shí)時(shí)熒光PCR的試劑往往除了陽性質(zhì)控品，還添加另一種熒光信號(hào)的內(nèi)控，有些不解，陽性質(zhì)控品不就是證明試劑沒問題的嗎，如果陽性質(zhì)控有信號(hào)，外控?zé)o信號(hào)，說明提取的樣本有抑制，而反應(yīng)試劑是沒問題，為什么還要加內(nèi)控呢？請(qǐng)大家各抒己見，不吝賜教！ |
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 QPCR 問題簡(jiǎn)答 |
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lovelydong
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★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
maweisimple: 金幣+1 2015-02-11 12:44:43
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
maweisimple: 金幣+1 2015-02-11 12:44:43
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測(cè)定的DNA是你提取的總DNA，未必含有你外標(biāo)那段基因（當(dāng)然也只有極端的情況才會(huì)出現(xiàn)這種情況），這個(gè)時(shí)候引入的各種陽性質(zhì)控、外標(biāo)以及內(nèi)標(biāo)才能發(fā)揮它們的作用，輔助你分析問題所在。不知道這樣解釋能否幫助你？ |
maweisimple7樓2015-02-11 10:28:57
2樓2015-02-10 15:16:59
★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
maweisimple: 金幣+3, 很棒 2015-02-10 16:49:07
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
maweisimple: 金幣+3, 很棒 2015-02-10 16:49:07
| 陽性質(zhì)控，是為了說明你的試劑沒有問題，由于陽性質(zhì)控并不和你的具體的每一個(gè)樣本一管擴(kuò)增。而有時(shí)候某個(gè)樣本是陰性，但是你無法判斷是由于真的是陰性呢還是標(biāo)本有抑制物導(dǎo)致的陰性，這時(shí)候就引入內(nèi)控，也就是所謂的內(nèi)標(biāo)，它分兩種，一種是管家基因，一種是額外添加進(jìn)去的質(zhì)粒或者其它（正常的樣本內(nèi)控或內(nèi)標(biāo)就肯定為陽性），和樣本一起參與提取，這時(shí)候如果標(biāo)本的目的片段是陰性，而內(nèi)標(biāo)也是陰性，說明這個(gè)標(biāo)本可能有抑制物，因?yàn)檫B內(nèi)標(biāo)都沒有出來，可以稀釋下臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)，而如果標(biāo)本的目的片段是陰性，而內(nèi)標(biāo)是陽性，那么結(jié)果為正常，即，此份樣本你的目的片段為陰性，不知道這樣解釋你是否明白。內(nèi)標(biāo)主要用來考察樣本擴(kuò)增的假陰性！ |
3樓2015-02-10 15:57:42
maweisimple
鐵蟲 (小有名氣)
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4樓2015-02-10 16:48:20
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