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[交流]
蛋白表達(dá)純化問題 已有5人參與
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| 去年做的原核表達(dá)，成功構(gòu)建了表達(dá)菌株，誘導(dǎo)表達(dá)量很高，純化效果也較好，就保了菌種，今年直接將菌種活化了，也做pcr鑒定了，再誘導(dǎo)表達(dá)怎么表達(dá)量變得很低，不知道為什么，而且純化也沒純化出來，請大家?guī)蛶兔�，謝謝！ |
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pennchem
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2樓2015-03-12 14:31:46
lomis
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3樓2015-03-12 15:14:37
4樓2015-03-12 16:20:02
5樓2015-03-12 16:21:51
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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你的保種菌是什么菌？以前我做蛋白表達(dá)純化時(shí)也曾出現(xiàn)類似問題：原來是可溶表達(dá)，保存后活化再表達(dá)卻是包涵體。給你以下幾個(gè)意見： 1. 你酶切鑒定的質(zhì)粒是你未表達(dá)的菌液里提出的嗎？ 2. 你可以再次劃板，挑取陽性克隆多個(gè)鑒定后做表達(dá)試驗(yàn)。 3. 分析你這次的表達(dá)條件是否有所不同。 |
6樓2015-03-13 15:44:31
7樓2015-03-13 16:55:03
8樓2015-03-13 17:20:23
9樓2015-03-13 21:00:56
10樓2015-03-16 09:05:22
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