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菌落PCR目的條帶淺，測序回來不對 已有3人參與
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菌落PCR有目的條帶但是很淺，送去測序回來與自己序列比對不上，到ncbi中blast后同源性都是果蠅等昆蟲類的物種，不知是哪步出了問題，求大神幫助 |
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sh_9153
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2樓2015-04-07 13:50:52
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3樓2015-04-07 13:56:37
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【答案】應(yīng)助回帖
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kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2015-04-08 09:33:38
cherry--: 金幣+1, ★★★很有幫助, 明白了 太感謝了 我又重新做了一次把很亮的送去測序 這回比對上了 2015-04-08 10:16:23
kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2015-04-08 09:33:38
cherry--: 金幣+1, ★★★很有幫助, 明白了 太感謝了 我又重新做了一次把很亮的送去測序 這回比對上了 2015-04-08 10:16:23
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你在涂板的時候會把沒有連上的片段也涂在培養(yǎng)基表面，這樣挑菌做PCR的時候自然也是能夠P出條帶來的，所以一般是選取菌落pcr高亮的搖菌提質(zhì)粒，然后雙酶切再驗(yàn)證一下，因?yàn)槟氵B上目的基因那一定也是能再切出來的，再送測序這樣把握更大一些 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
7樓2015-04-07 18:58:43
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8樓2015-04-09 12:57:24
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9樓2015-04-10 16:08:04
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