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帆蚌俠新蟲 (初入文壇)
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畢赤酵母表達(dá)蛋白電轉(zhuǎn)化遺傳霉素篩選后，跑PCR出現(xiàn)的問(wèn)題 已有1人參與
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| 畢赤酵母表達(dá)蛋白，將重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化進(jìn)入GS115后，用了濃度為1.5的G418遺傳霉素篩選后，挑菌裂解，用3AOX1和自己基因的上游引物跑PCR，除了我要的目的片段外，怎么還有一條100的片段��？？？大神們，help |
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2015-05-11 23:05:10, 433.05 K
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luwei13566
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-12 13:29:39
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LZ你的問(wèn)題有必要再做兩個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)： 1.用5'AOX/你基因下游引物，以你的裂解液為模板擴(kuò)增一下 2.用5'AOX/3'AOX為引物，擴(kuò)增一下 以上兩個(gè)結(jié)合你用的那一套引物基本上可以驗(yàn)證你基因插入的位置 你圖片上那兩條帶是伴生的，我估計(jì)下面那條帶是因?yàn)槟愕囊锊惶禺�，你可以用你�?gòu)件好的重組質(zhì)粒做模板，用基因上游引物/3’AOX做引物做個(gè)擴(kuò)增，多半也有下面那條雜帶。 |
2樓2015-05-12 09:43:25
pangzi-胖子
新蟲 (初入文壇)
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3樓2015-05-16 06:53:33
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